生殖激素對體外培養(yǎng)的水牛卵泡顆粒細(xì)胞凋亡的影響研究.pdf

1、本研究選用水牛排卵前卵泡的顆粒細(xì)胞為研究對象，在體外培養(yǎng)體系中添加影響卵巢功能的促卵泡素(FSH)、雄激素、雌二醇和孕酮，探討它們在不同濃度下對顆粒細(xì)胞凋亡、分裂和分泌的影晌。采用流式細(xì)胞術(shù)研究了體外培養(yǎng)的顆粒細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞分裂指數(shù)，并用放射免疫分析方法檢測了培養(yǎng)液中孕酮和雌激素濃度的變化，Hochest33342熒光染色檢測無血清培養(yǎng)的細(xì)胞中是否存在凋亡細(xì)胞。本研究結(jié)果表明，采用無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時后，Hochest33342熒

2、光染色出現(xiàn)明亮的藍(lán)色團(tuán)塊，證實為凋亡的顆粒細(xì)胞，熒光顯微鏡視野下計數(shù)凋亡率與流式細(xì)胞術(shù)檢測無明顯差異，可作為本實驗對照。體外培養(yǎng)的水牛顆粒細(xì)胞經(jīng)過不同單位濃度FSH、雄激素、雌激素和孕酮處理后，發(fā)現(xiàn)FSH能顯著地抑制顆粒細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞分裂，并能顯著地促進(jìn)顆粒細(xì)胞分泌雌、孕激素，都具有劑量依賴性；雄激素顯著地促進(jìn)顆粒細(xì)胞凋亡，降低了細(xì)胞分裂及分泌雌、孕激素的濃度；雌二醇能顯著地抑制顆粒細(xì)胞凋亡，促進(jìn)顆粒細(xì)胞分泌孕激素，呈劑量依賴性，亦

3、促進(jìn)顆粒細(xì)胞分裂但無劑量差異性；孕酮在1ng/mL～1μg/mL范圍內(nèi)能抑制顆粒細(xì)胞凋亡，而在1pg/mL、1mg/mL濃度下卻引起顆粒細(xì)胞凋亡，并且抑制顆粒細(xì)胞分泌雌激素，但不影響細(xì)胞分裂。當(dāng)1mg/mLFSH分別與1mg/mL、1μg/mL的雄激素共同處理顆粒細(xì)胞時，凋亡率也明顯低于對照組和1mg/mL、1μg/mL雄激素組(P＜0.01)，F(xiàn)SH能強(qiáng)烈地抑制雄激素促凋亡作用，促進(jìn)顆粒細(xì)胞分裂和分泌雌、孕激素；1mg/mL雌二醇分別