Bcl-2和Inhibinα基因對鵝卵泡顆粒細胞增殖凋亡的影響.pdf

1、為研究Bcl-2和Inhibinα基因對顆粒細胞增殖凋亡的作用，構建了Bcl-2基因干擾載體(psiRNAb1、psiRNAb2、psiRNAb3)和Inhibinα基因干擾載體(psiRNA-INHα1和psiRNA-INHα2)，利用鵝F1和閉鎖卵泡顆粒細胞模型研究干擾這兩個基因后的表型。分別用熒光顯微鏡和流式細胞儀測定轉染RNA干擾質粒48h后的轉染效率、Bcl-2和Inhibinα基因表達水平、細胞生長周期、細胞凋亡指數(apo

2、ptosisindex，AI)和增殖指數(proliferationindex，PI)的變化；用放免法測定細胞培養(yǎng)上清中雌二醇和孕酮水平。試驗結果如下： 1.利用Ambion的RNA干擾設計軟件，根據Genbank中已發(fā)表的序列(D11381)針對Bcl-2基因設計三對干擾序列，并根據RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-ZsGreen載體的特點在設計的序列上做了分別命名為psiRNAb1、psiRNAb2、psiRN

3、Ab3。針對Inhibinα亞基(NM-001031257)設計兩對干擾序列，分別命名為psiRNA-INHα1和psiRNA-INHα2。 2.采用無血清培養(yǎng)方法體外培養(yǎng)鵝卵泡顆粒細胞，將本文構建的Bcl-2和Inhibinα基因干擾載體脂質體包裹轉染顆粒細胞，48h后熒光顯微鏡檢測轉染效率，干擾組轉染效率達到60％以上。 3.流式細胞儀檢測顆粒細胞中Bcl-2蛋白表達，3個干擾組中當Bcl-2基因被干擾后顆粒細胞分泌

4、Bcl-2蛋白明顯降低，且差異顯著，尤其是psiRNAb3組蛋白表達最低。 4.當顆粒細胞Bcl-2表達下調時，顆粒細胞增殖指數明顯上升，且隨Bcl-2表達量減少而上升，增加的程度與Bcl-2表達量顯著負相關(r=-0.872，p<0.05)，顆粒細胞凋亡指數也明顯上升，增加的程度與Bcl-2表達減少顯著相關(r=-0.951，p<0.05)。放免法檢測Bcl-2基因干擾后顆粒細胞P分泌水平顯著上升，E2分泌受到抑制。

5、5.閉鎖卵泡顆粒細胞凋亡比例顯著高于F1卵泡顆粒細胞，Inhibinα基因干擾后F1和閉鎖卵泡顆粒細胞抑制素表達水平比對照組降低(P<0.05)。 6.當顆粒細胞Inhibinα基因表達下調時，細胞凋亡指數和增殖指數顯著高于對照組(p<0.05)，細胞分泌雌激素水平顯著下降(p<0.05)，而細胞P分泌顯著上升(p<0.05)。 結果表明: (1)Inhibinα基因干擾后卵泡顆粒細胞抑制素表達水平比對照組顯著降