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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:制備不同純度吳茱萸次堿和吳茱萸堿的吳茱萸提取物,比較其在大鼠體內(nèi)的吸收規(guī)律,確定提取物純度與兩堿吸收的依賴關(guān)系。探索提高兩堿生物利用度的可能途徑與方法,為吳茱萸的開發(fā)研究提供基礎(chǔ),也為難溶型化合物的劑型選擇與設(shè)計(jì)提供新思路。
方法與結(jié)果:建立了吳茱萸提取物中兩堿(Rut和Evo)的HPLC含量測(cè)定方法。以兩堿的提取率為指標(biāo),單因素實(shí)驗(yàn)進(jìn)行提取方法及藥材預(yù)處理方法的篩選。采用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)考察了乙醇用量、乙醇濃度、提取時(shí)
2、間和提取次數(shù)對(duì)兩堿提取率的影響,優(yōu)化了提取工藝條件,確定最佳提取工藝為用12倍藥材量的60%乙醇回流提取3次,每次3小時(shí)。提取液回收乙醇后得粗品,將粗品采用醇提逐步水沉法進(jìn)一步分離純化。采用薄層色譜法為鑒定方法,通過考察醇提過程中醇的濃度和倍數(shù)以及水沉過程中加入水的體積,確定分離純化的工藝為用20倍量90%的乙醇溶解粗品后,逐步加入水使提取液的乙醇終濃度依次為45%、33%、25%時(shí),收集靜置離心所得的沉淀。最后將沉淀用甲醇重結(jié)晶制備得
3、到三種不同純度的吳茱萸提取物:高純度(含45%Rut,35%Evo),中純度(含28% Rut,21% Evo),低純度(含9% Rut,7%Evo)。建立HPLC-UV法測(cè)定大鼠血樣中Rut和Evo濃度的方法。進(jìn)行不同純度吳茱萸提取物在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)比較研究。按Rut為40mg·kg-1,Evo為31 mg·kg-1的劑量給大鼠灌胃所制備的三種不同純度的吳茱萸提取物。分別于灌胃后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3
4、、4 h取血進(jìn)行濃度測(cè)定,血藥濃度時(shí)間數(shù)據(jù)以DAS2.0軟件處理。高、中、低純度組中Rut的Cmax分別為215.34±80.39、94.46±28.79、22.82±4.39 ng·ml-1(p0.01),Evo的分別為164.77±65.07、78.82±23.52、43.39±17.20 ng·ml-1(p0.01);Rut的AUC0-4分別為117.06±26.50、117.38±42.22、36.75±5.55 ng·h·ml
5、-1,Evo的分別為148.91±39.13、122.16±23.33.80.38±14.28ng·h·ml-1純度提高,Rut和Evo的Cmax和AUC0-4依次增加,純度間參數(shù)差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),提示純度提高,Rut和Evo的吸收加快,生物利用度提高。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),吳茱萸提取物中Rut和Evo的生物利用度比兩堿的單體均有提高。提示提取物純度提高與生物利用度增加的關(guān)系可能存在上限,超過一定程度后,繼續(xù)提高純度可導(dǎo)致吸收減少,
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