吳茱萸提取物純度與體外經(jīng)皮滲透的關(guān)系及其鎮(zhèn)痛作用研究.pdf

1、一、目的
　　 吳茱萸堿/吳茱萸次堿(EVO/RUT)是吳茱萸提取物的主要活性成分，藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)二者通過(guò)激動(dòng)辣椒素受體，耗竭神經(jīng)元/纖維的神經(jīng)遞質(zhì)而阻斷疼痛傳導(dǎo)，并可下調(diào)環(huán)氧合酶-2的表達(dá)或抑制其活性，可能是一種多通道的鎮(zhèn)痛藥物。但辣椒素受體激活伴隨CGRP的合成和釋放增加可能帶來(lái)全身不良反應(yīng)，局部用藥是更好的選擇。本課題在研究提取物純度與溶解度、表觀分配系數(shù)、體外經(jīng)皮滲透能力的關(guān)系以及化學(xué)促滲劑對(duì)其透皮的促進(jìn)作用的基礎(chǔ)上，構(gòu)

2、建不同載藥量的吳茱萸提取物乳膏；考察乳膏對(duì)熱板和福爾馬林致小鼠疼痛的抑制作用，并通過(guò)對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)CGRP及炎性因子PGE2的表達(dá)量測(cè)定，結(jié)合炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)程度觀察，探討提取物外用制劑在體鎮(zhèn)痛的可能機(jī)制。本課題首次探索吳茱萸提取物局部施予的形式、EVO/RUT經(jīng)皮滲透規(guī)律及其影響因素，目的是為吳茱萸提取物新適應(yīng)癥及給藥途徑的研究開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)。
　　 二、方法與結(jié)果
　　 1.提取物純度對(duì)溶解度及表觀分配系數(shù)的影響
　　

3、 采用平衡法和搖瓶法測(cè)定不同純度提取物中EVO和RUT的溶解度及表觀分配系數(shù)，考察純度對(duì)溶解度和表觀分配系數(shù)的影響。結(jié)果EVO和RUT總純度為71.0％、49.2％和25.4％的提取物中EVO和RUT在PEG-400中溶解度分別為：8～14 mg/mL和13～19mg/mL；在異丙醇中均小于7 mg/mL。介質(zhì)對(duì)EVO和RUT的溶解能力依次為PEG-400>Tween-80>RH-40>MCT>無(wú)水乙醇≈1，2-丙二醇≈1.3-丁二醇

4、≈異丙醇；lgP在0.6～1.2之間。純度影響EVO和RUT在水性和油性溶劑中的溶解度，純度越高，溶解度越低，而對(duì)其在表面活性劑中的溶解度無(wú)明顯影響；純度與表觀分配系數(shù)無(wú)相關(guān)性；pH值對(duì)提取物中EVO和RUT的溶解和分配均無(wú)明顯影響。
　　 2.提取物純度及促滲劑對(duì)體外經(jīng)皮滲透的影響
　　 建立體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn)方法，探討了純度和促滲劑對(duì)EVO和RUT體外經(jīng)皮滲透行為的影響；采用膠帶剝離角質(zhì)層，考察角質(zhì)層在經(jīng)皮滲透中的作用

5、，研究EVO和RUT體外經(jīng)皮滲透的特點(diǎn)和規(guī)律，并利用DSC法探索促滲劑對(duì)EVO和RUT促滲的可能機(jī)制。
　　 不同純度提取物中EVO和RUT的滲透速率分別為0.15～0.18μg/h·cm2和0.17～0.21μg/h·cm2，時(shí)滯分別在5.46～6.63 h和7.68～8.83h之間，單位面積24 h累積滲透量均在1.88～3.35μg/cm2之間，表現(xiàn)出滲透速率慢，時(shí)滯長(zhǎng)，滲透量低的特點(diǎn)，滲透動(dòng)力學(xué)符合零級(jí)方程。各純度間累計(jì)

6、滲透量和滲透參數(shù)無(wú)顯著差異。去除角質(zhì)層后，EVO和RUT經(jīng)活性表皮的滲透速率及累積滲透量提高了3～6倍，但時(shí)滯無(wú)差異，表明角質(zhì)層是EVO和RUT經(jīng)皮滲透的主要屏障，在活性表皮的擴(kuò)散過(guò)程是其限速步驟。油酸能提高EVO和RUT的滲透速率Js至0.40～0.51；而Transcutol則能使EVO的擴(kuò)散系數(shù)Dm提高至1.74左右，時(shí)滯縮短至3.88 h。將脂溶性較高的促滲劑油酸或橙花叔醇及O/W型表面活性劑Transcutol配伍使用，能提高

7、EVO和RUT的滲透速率，并縮短時(shí)滯。DSC結(jié)果顯示促滲劑通過(guò)增加角質(zhì)層脂質(zhì)的流動(dòng)性發(fā)揮促滲作用。
　　 3.提取物外用制劑的構(gòu)建及評(píng)價(jià)
　　 單因素考察篩選了乳膏類型、HLB值、乳化劑組合等因素對(duì)乳膏外觀、粒子形態(tài)、粘稠性和累積滲透量的影響，確定以O(shè)/W型乳膏為好，處方組成為：高純度吳茱萸提取物(0.1％～0.4％)、PEG-400(25％)、單硬脂酸甘油酯(1％)、十八醇(8％)、橙花叔醇(5％)、Span60(4.

8、1％)、RH-40(3.9％)、丙二醇(5％)。
　　 乳膏外觀為淡黃色半固體，均勻細(xì)膩，pH為6.81±0.04，錐入度在102.4～119.7 mm。通過(guò)改良制備工藝，將藥物PEG-400溶液加入油相，避免了水對(duì)EVO和RUT溶解度的不良影響，提高了乳膏的載藥量。分散相的PEG-400未向連續(xù)相轉(zhuǎn)移，未出現(xiàn)明顯的析晶或相分離現(xiàn)象；乳膏于西林瓶中40℃和-20℃條件下放置10天，外觀無(wú)明顯改變。0.1％、0.2％和0.4％乳膏

9、中EVO和RUT經(jīng)離體乳豬皮膚的累積滲透量呈載藥量依賴性。
　　 4.提取物乳膏的局部鎮(zhèn)痛作用及機(jī)制研究
　　 采用昆明小鼠為模型動(dòng)物，考察提取物乳膏對(duì)熱刺激和化學(xué)刺激引起疼痛的作用，并采用ELISA測(cè)定疼痛部位皮膚中CGRP及PGE2的表達(dá)，利用組織切片考察疼痛部位炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的程度，探討乳膏在體鎮(zhèn)痛的可能機(jī)制。
　　 局部應(yīng)用提取物乳膏能提高小鼠對(duì)熱刺激和化學(xué)刺激的耐受，并呈載藥量依賴性。ELISA結(jié)果表明提

10、取物乳膏能明顯降低皮下注射福爾馬林3min后疼痛部位皮膚中CGRP的表達(dá)，且CGRP隨時(shí)間的變化減小；而乳膏對(duì)皮膚中PGE2的含量無(wú)影響；組織切片結(jié)果證實(shí)提取物乳膏能顯著抑制福爾馬林引起的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度，推測(cè)鎮(zhèn)痛機(jī)制可能是耗竭并阻斷CGRP的傳導(dǎo)并協(xié)同抗炎作用，但抗炎作用的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。
　　 三、結(jié)論
　　 提取物純度能影響EVO和RUT的溶解度，而對(duì)表觀分配系數(shù)及體外經(jīng)皮滲透的影響無(wú)顯著差異。EVO和