南海鱸形目魚類寄生異尖線蟲幼蟲的分子鑒定及親緣關系分析.pdf

1、作者首次對采自我國南海鱸形目魚類體內(nèi)寄生的異尖科線蟲幼蟲進行了分子分類學鑒定，從410尾隸屬于78種魚體內(nèi)共采集到2396條異尖科線蟲幼蟲（異尖屬的除外），結(jié)合形態(tài)學分類方法和分子生物學方法對南海魚類寄生線蟲進行了調(diào)查研究。根據(jù)形態(tài)觀察和參數(shù)測量對線蟲幼蟲進行初步分類，從每種類型中挑選出代表性樣品，運用保守引物擴增單條蟲體的rDNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS區(qū)），對PCR產(chǎn)物分別用限制性內(nèi)切酶TaqI和RsaI進行酶切。
　　 結(jié)合P

2、CR-RFLP技術(shù)，依據(jù)酶切片段長度的多態(tài)性，部分樣品測定的序列及形態(tài)特征，得出的實驗結(jié)果顯示南海鱸形目魚類寄生異尖科線蟲幼蟲（異尖屬的除外）共有6種:Raphidascarislophii,Hysterothylaciumlongilabrum，H.zhoushanensis,H.amoyense,H.aduncum和宮脂屬未定種Hysterothylaciumsp.NH-2012。其中Hysterothylaciumsp.NH-20

3、12和R.lophii是優(yōu)勢種，2396個異尖科線蟲幼蟲樣品中有1280個為Hysterothylaciumsp.NH-2012，914條線蟲為R.lophii，約占總數(shù)的53％和38％，在日本金線魚Namipterusjaponicus、藍圓鲹Decapterusmaruadsi、金槍魚Thunnusalalunga、帶魚Trichiurushaumela、蝴蝶魚Chaetodontidaebutterflyfish、鑲點石斑魚Epi

4、nephelusamblycephalus、黃鯛Dentextumifrons、線紋擬棘鯛Centroberyxlineatus、竹莢魚Trachurusjaponicus等78種所檢魚類體內(nèi)均有發(fā)現(xiàn)，并報道了6種異尖線蟲的形態(tài)特征及其rDNAITS序列，統(tǒng)計其在南海海魚體內(nèi)的感染情況。
　　 本實驗還以簡單異尖線蟲Anisakissimplex為外群，將本研究獲得的6種異尖線蟲的7種序列以及從Genbank上篩選的15個代表性

5、的ITS序列，通過MEGA5.0軟件用最大似然法(ML)和最大簡約法(MP)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，分析其親緣關系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，系統(tǒng)樹有兩個大的分支，宮脂屬和針蛔屬各在一支。Ea3和Hysterothylaciumfabri的親緣關系相對比較近，但并沒有聚類在一起。Sa1和Hysterothylaciumaduncum(HQ702732.1)聚類在一起。Pj1和Hysterothylaciumlongilabrum(JQ520159.1)聚類在一

6、起。樣品Pe52和Hysterothylaciumamoyense(EU828749.1)聚類在一起。Dm23、A145和Hysterothylaciumzhoushanensis(JX028280.1)、(JX028281.1)聚類在一起。Ta2和Raphidascarislophii(JX974559.1)聚類在一起。系統(tǒng)發(fā)育分析再次驗證了這些線蟲樣品的分類地位。
　　 本論文首次對南海鱸形目魚類體內(nèi)寄生異尖線蟲幼蟲的分子鑒