福建沿海魚類異尖線蟲幼蟲感染情況調(diào)查及其分類鑒定方法的研究.pdf

1、異尖線蟲是世界各大海域魚類的主要寄生線蟲，異尖線蟲病屬于海洋自然疫源性疾病。人異尖線蟲病主要是由于食入含有異尖線蟲科某些種的活的三期幼蟲引起的。1993年我國(guó)將異尖線蟲病列入了《中華人民共和國(guó)禁止進(jìn)境的動(dòng)物傳染病、寄生蟲病名錄》。由于我國(guó)是一個(gè)海魚消費(fèi)大國(guó)，因此對(duì)異尖線蟲進(jìn)行準(zhǔn)確的種類鑒定不僅是從事異尖線蟲研究的前提和基礎(chǔ)，也對(duì)防治人和動(dòng)物的異尖線蟲病具有重要意義。 本研究對(duì)福建沿海養(yǎng)殖漁排異尖線蟲感染情況進(jìn)行了調(diào)查，感染率最高

2、的是真鯛、鱸魚、帶魚、美國(guó)紅魚，主要集中在7-9月份，送檢樣品的感染率可達(dá)到100.00％。其中感染強(qiáng)度最高的是真鯛，在8月上旬，感染強(qiáng)度可以達(dá)到43.00條/尾。而秋刀魚和海洋軟體動(dòng)物魷魚、墨魚檢出率為零，但并不能排除它們感染異尖線蟲的可能。而對(duì)于福州口岸進(jìn)口海水魚類，感染率最高的是帶魚和鰻魚，高達(dá)100.00％，其中鰻魚的感染強(qiáng)度可達(dá)59.43條/尾。而抽檢的魷魚、墨魚等海洋軟體動(dòng)物感染率則為零，這與福建沿海漁排送檢樣品的檢查結(jié)果是

3、一致的。異尖線蟲體外存活試驗(yàn)結(jié)果顯示：在不同溫度下存活試驗(yàn)中，6℃的存活時(shí)間最長(zhǎng)，即在類似魚體溫度中可以存活多達(dá)一個(gè)月的時(shí)間，反映了異尖線蟲在魚體中造成長(zhǎng)時(shí)間的持續(xù)感染；在最適溫度下不同調(diào)料存活試驗(yàn)中，蟲體在56℃白酒中存活時(shí)間最短，其次是在大蒜原汁中的存活時(shí)間。而在其他調(diào)料中的存活時(shí)間之長(zhǎng)出乎意料，這證明生魚片短時(shí)間的腌制，不可能將異尖線蟲幼蟲殺死。 異尖線蟲幼蟲傳統(tǒng)的分類方法主要為形態(tài)學(xué)鑒定法。在已有的工作基礎(chǔ)上，本研究第二

4、章介紹了如何用形態(tài)學(xué)方法對(duì)異尖線蟲做初步的鑒定，將采集到的異尖線蟲幼蟲鑒定到屬(個(gè)別種類可以鑒定到種)。形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果顯示，從福建周邊海域養(yǎng)殖漁排真鯛、螄魚等大部分養(yǎng)殖魚種體內(nèi)檢獲的異尖線蟲為簡(jiǎn)單異尖線蟲，可分為簡(jiǎn)單異尖線蟲Ⅰ型和簡(jiǎn)單異尖線蟲Ⅱ型。而采自馬來西亞帶魚、印尼紅目鰱和福建養(yǎng)殖漁排三線雞魚、美國(guó)紅魚體內(nèi)的異尖線蟲則為宮脂屬異尖線蟲。其中，檢自馬來西亞帶魚、印尼紅目鰱和美國(guó)紅魚體腔的絕大部分異尖線蟲為灰海鰻對(duì)盲囊線蟲(Contr

5、acaecum murenesoxi)。 本研究將分子分類方法與形態(tài)學(xué)鑒定方法相結(jié)合，得到較為理想的鑒定結(jié)果，并建立了一套可用于對(duì)異尖線蟲種類做出快速、準(zhǔn)確鑒定的特異PCR檢測(cè)方法。首先，用通用引物擴(kuò)增出間隔區(qū)片段，之后送樣測(cè)序。再將所得序列與NCBI上Genebank序列相比較，即可將大部分蟲體鑒定到種。通過測(cè)序，本實(shí)驗(yàn)可將測(cè)序樣品鑒定為：A.pegreffii，C.murenesoxi、A.typica、A.physeter

6、is和H.aduncum。對(duì)于尚有疑慮的樣品，則用分子方法進(jìn)一步加以鑒定。本實(shí)驗(yàn)中，對(duì)僅憑測(cè)序尚不能確定到種的樣品FJ-1、FJ-2、FJ-3、SD、SH和HY-1，運(yùn)用PCR-RFLP和錯(cuò)配PCR的方法將其分別鑒定為：A.pegreffii、A.pegreffii、A.pegreffii、A.pegreffii、A.pegreffii和Hybrid genotype。 其次，則是設(shè)計(jì)特異引物，建立異尖線蟲的特異PCR檢測(cè)方法。

7、本研究設(shè)計(jì)了科、屬和種這三個(gè)分類單元的特異引物，其中K1為兼并引物。通過實(shí)驗(yàn)證明，各引物的特異性好，不擴(kuò)增其它對(duì)照蟲體及宿主的DNA。本研究中特異PCR的敏感性結(jié)果相差較大，敏感度范圍為0.00689-1.03906 ng，這主要與引物設(shè)計(jì)有關(guān)，敏感性處于較高水平。 本研究對(duì)福建沿海養(yǎng)殖漁排常見魚種異尖線蟲感染情況做了一個(gè)調(diào)查，結(jié)果表明，不同魚種感染異尖線蟲種類和強(qiáng)度不同，時(shí)間不同感染強(qiáng)度也不同，有較為明顯的季節(jié)傾向。這對(duì)實(shí)際生