去甲腎上腺素調(diào)控脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，不穩(wěn)定粥樣硬化斑塊的破裂導(dǎo)致血栓形成及急性冠脈綜合癥的發(fā)生?；|(zhì)金屬蛋白-9可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，研究表明，基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)分泌失衡，與粥樣斑塊的不穩(wěn)定密切相關(guān)。脂多糖與去甲腎上腺素均可參與粥樣斑塊的病理發(fā)展過(guò)程。但脂多糖與去甲腎上腺素如何調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)及相關(guān)的機(jī)制仍不清楚。我們的研究目的是探討去甲腎上腺素與脂多糖，這兩種與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的因子，對(duì)于基質(zhì)金屬蛋白酶-

2、9表達(dá)的調(diào)控及機(jī)制。
　　方法：
　　單核細(xì)胞參與粥樣硬化斑塊的病理進(jìn)程。我們利用單核細(xì)胞系THP-1以及THP-1誘導(dǎo)分化來(lái)的巨噬細(xì)胞測(cè)定去甲腎上腺素與LPS對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)的影響。主要研究方法包括:
　　1.利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶，基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1mRNA在單核細(xì)胞的表達(dá)情況。
　　2.利用Elisa測(cè)定細(xì)胞上清中基質(zhì)金屬蛋白酶-9以及基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1的表達(dá)。

3、
　　3.利用明膠酶譜方法測(cè)定THP-1以及THP-1誘導(dǎo)而來(lái)的巨噬細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9的明膠降解活性。
　　4.Western Blot實(shí)驗(yàn)研究去甲腎上腺素與脂多糖對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶-9分泌相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控。
　　5.通過(guò)應(yīng)用腎上腺素受體抑制劑，MAPK通路抑制劑以及C-FOS siRNA等干預(yù)手段來(lái)闡明具體的機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.去甲腎上腺素可以上調(diào)脂多糖介導(dǎo)的THP-1細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9/

4、基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1的mRNA以及蛋白表達(dá)。
　　2.在THP-1及THP-1誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞，去甲腎上腺素可以增強(qiáng)脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的酶活性。
　　3.Beta腎上腺素受體抑制劑普萘洛爾預(yù)處理可以抑制去甲腎上腺素/脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)，而alpha腎上腺素受體抑制劑酚妥拉明則沒有作用。
　　4.去甲腎上腺素上調(diào)脂多糖介導(dǎo)的單核細(xì)胞ERK，JNK的磷酸化水平，并抑制P38的激活。ER

5、K，JNK抑制劑抑制了去甲腎上腺素和脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的分泌及酶活性。
　　5.去甲腎上腺素可以上調(diào)LPS介導(dǎo)的C-FOS的表達(dá)。這種作用可以被ERK，JNK的抑制劑以及普萘洛爾所逆轉(zhuǎn)。C-FOS敲低后，去甲腎上腺素/LPS介導(dǎo)的MMP-9的酶活性上調(diào)被抑制。
　　6.去甲腎上腺素可以上調(diào)脂多糖介導(dǎo)的C-JUN的磷酸化水平。
　　結(jié)論：
　　1.去甲腎上腺素可以增強(qiáng)脂多糖介導(dǎo)的單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞基質(zhì)金