犬乳恒牙替換期基質(zhì)金屬蛋白酶9的表達及意義.pdf

1、本實驗?zāi)康脑谟谕ㄟ^研究乳恒牙替換期破骨細胞對基質(zhì)金屬蛋白酶9MMP-9表達的強弱來探討MMP-9在這一過程中的作用。為此，完成了以下4個實驗： 實驗1：為破骨細胞體外培養(yǎng)方法的研究。本實驗采用新生大鼠顱蓋骨消化法培養(yǎng)成骨細胞，再加入細胞因子，分別刺激脾細胞和骨髓細胞中單核細胞向破骨細胞分化。結(jié)果表明：骨髓細胞組單核細胞融合形成破骨細胞的時間早于脾細胞組，而且破骨細胞的數(shù)量也較脾細胞組多，并有統(tǒng)計學意義。 實驗2：為體外培

2、養(yǎng)破骨細胞MMP-9的免疫組化[4]及原位雜交研究。本實驗采用新生1d內(nèi)的SD大鼠為取材標本，運用顱蓋骨消化法和骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)破骨細胞。破骨細胞經(jīng)TRAP染色鑒定后，再進行免疫組化及原位雜交染色，免疫組化染色結(jié)果表明：實驗組破骨細胞染色陽性，對照組(用PBS代替一抗)陰性。原位雜交染色結(jié)果表明：實驗組破骨細胞染色陽性，對照組(用PBS代替探針)陰性。 實驗3：為犬乳恒牙替換期破骨細胞數(shù)量的研究。分別取乳牙列期，乳恒牙替換期，恒牙

3、列期的本地犬各一只，解剖分離頸動脈后斷頭處死，頸動脈插管，用生理鹽水沖洗，4％甲醛溶液進行組織內(nèi)固定，分離上、下頜骨，外固定，脫鈣，截取牙根及其周圍組織的組織塊，制備石蠟切片，HE染色。結(jié)果表明：替牙列期犬牙根周圍組織破骨細胞數(shù)量明顯高于乳牙列期組，與恒牙列期組雖無統(tǒng)計學差異，但其絕對值仍然高于恒牙列期組。 實驗4：為犬乳恒牙替換期MMP-9的免疫組化及原位雜交研究。實驗動物及石蠟切片制備同實驗三，石蠟切片制備好后進行免疫組化及