野油菜黃單胞菌乙?；富虻那贸巴蛔凅w遺傳特性的研究.pdf

1、黃原膠是由野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)經(jīng)過(guò)發(fā)酵而產(chǎn)生的一種胞外多糖，由于它特殊的理化功能，被廣泛應(yīng)用在各個(gè)行業(yè)。黃原膠的生物合成是一個(gè)既細(xì)致又復(fù)雜的過(guò)程，需要各種酶及蛋白因子的參與，如乙酰化酶、尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶、縮酮丙酮酸轉(zhuǎn)移酶、五種特定的轉(zhuǎn)移酶和多聚酶。乙?；甘屈S原膠生產(chǎn)過(guò)程中一種非常重要的酶，它會(huì)影響黃原膠中乙?；暮浚S原膠的乙?；颗c黃原膠的穩(wěn)定性及部分理化特性正相關(guān)，因此，本實(shí)驗(yàn)

2、選取的研究對(duì)象為野油菜黃單胞菌的乙酰化酶基因。
　　本研究以野油菜黃單胞菌CICC10258作為試驗(yàn)菌株，提取基因組DNA，根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增出乙?；富蚱?，與pMD19-T載體連接獲得重組質(zhì)粒并成功克隆該基因。EcoRI酶切重組質(zhì)粒獲得乙?；富虻腅coRI酶切片段，與EcoRI酶切回收的pK18mobSacB自殺質(zhì)粒相連，構(gòu)建重組自殺性質(zhì)粒載體。經(jīng)鑒定，將重組自殺性質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化野油菜黃單胞菌CIC

3、C10258的感受態(tài)細(xì)胞，成功獲得了乙?；富蛲蛔凅w。以野油菜黃單胞菌CICC10258作為對(duì)照，分析和檢測(cè)突變體的遺傳特性。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)敲除了乙酰化酶基因并獲得突變體；突變體在營(yíng)養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)受到抑制，突變體的黃原膠產(chǎn)量減少，突變體的三種胞外酶活性也受到抑制。經(jīng)與野油菜黃單胞菌CICC10258作為對(duì)照分析，證明乙酰化酶基因與黃原膠的合成、三種胞外酶活性有關(guān)。該研究不僅為構(gòu)建基因工程菌奠定了基礎(chǔ)，而且為野油菜黃單胞菌生產(chǎn)黃