野油菜黃單胞菌野油菜致病變種致病相關基因的鑒定及分析.pdf

1、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種(簡稱Xcc)是十字花科植物重要的病原細菌，能廣泛的引起十字花科作物的黑腐病。Xcc侵染寄主植物的過程是非常復雜的，一般經(jīng)過吸附-識別-侵入-繁殖-定殖-擴展-顯癥7個過程，而且每一個過程都有相應的基因參與；Daniels預測大約有20～100個基因參與Xcc的致病過程，而目前已經(jīng)實驗證實的致病相關基因大約有60多個?？墒歉鶕?jù)野油菜黃單胞菌野油菜致病變種8004菌株基因組數(shù)據(jù)，預測的致病相關基因有250多個。

2、由此可見在該病原菌中，尚有許多未知的致病相關基因有待人們去鑒定。目前，尋找致病相關新基因的方法主要有3種：一是構建突變體的方法，該方法是通過構建病原菌基因組中每一個基因的突變體，然后進行致病性檢測；二是基因差別表達的方法，該方法是通過GUS報告系統(tǒng)或通過DNA芯片雜交檢測在豐富培養(yǎng)基中和寄主體內或模仿寄主體內環(huán)境條件的培養(yǎng)基的基因表達差異，一般將那些受寄主誘導的基因作為致病相關基因的候選基因；三是生物信息學分析法，該方法通過在病原菌基因

3、組中尋找和已報道的其他病原菌的致病相關基因的同源基因作為該病原菌的致病相關基因的候選基因。本研究采用了第一和第三種方法進行Xcc致病相關新基因的鑒定。首先，在本實驗已經(jīng)構建了Xcc8004的Tn5gusA5插入突變體庫并對所有突變體進行了致病性檢測的前提下，我們利用標記置換(marker exchange)的方法對10個致病力下降的Tn5gusA5插入突變體重新構建突變體，證實2個與Xcc致病相關的插入位點，通過進一步的非極性突變體的構