納米細(xì)菌與Ⅲ型前列腺炎以及前列腺結(jié)石發(fā)病關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景及目的： Ⅲ型前列腺炎(CPPS)是臨床上最常見的慢性前列腺炎，迄今病因不清，治療極其困難。一直以來，人們主要對其感染外的病因進(jìn)行了探索并提出了多種假說，但均不能完全解釋該病的臨床特點(diǎn)。鈣化灶的存在以及抗生素治療常常療效明顯，啟示我們可能有不被常規(guī)檢查方法發(fā)現(xiàn)的感染物存在。 CPPS患者前列腺中經(jīng)常出現(xiàn)結(jié)石，這種前列腺結(jié)石是在前列腺腺泡和腺管內(nèi)形成的真性結(jié)石，它形成的原因現(xiàn)在還不很明了，可能與前列腺腺泡和排泄管慢性炎

2、癥、促或抑成核因子的作用、鈣離子濃度等因素有關(guān)。在前列腺結(jié)石的形成中是否有不為我們認(rèn)知的感染性病因存在同樣值得我們探索。 而納米細(xì)菌(nanobacteria)的發(fā)現(xiàn)和該細(xì)菌本身獨(dú)特的致病特點(diǎn)為闡明CPPS和前列腺結(jié)石的病因提供了一條嶄新的思路。 納米細(xì)菌是新發(fā)現(xiàn)的納米級(50～200nm)球菌，在普通的微生物培養(yǎng)條件下不能生長。它能感染人體內(nèi)多種細(xì)胞，導(dǎo)致被感染細(xì)胞發(fā)生骨骼外鈣化(病理性鈣化)，同時(shí)釋放毒素引起組織炎癥

3、。該發(fā)現(xiàn)為Ⅲ型前列腺炎和前列腺結(jié)石發(fā)生機(jī)制研究提供了全新的切入點(diǎn)，現(xiàn)未見有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，值得研究。通過研究，有望證實(shí)納米細(xì)菌在CPPS和前列腺結(jié)石中的病因作用，并為從清除納米細(xì)菌入手來治療CPPS和前列腺結(jié)石提供理論依據(jù)。 方法： 本研究擬從大樣本Ⅲ型前列腺炎分泌液和前列腺結(jié)石中分離培養(yǎng)納米細(xì)菌，并采用間接免疫熒光、鈣染色、電鏡觀察、16srRNA基因擴(kuò)增及測序等方法對可疑培養(yǎng)物進(jìn)行鑒定，研究納米細(xì)菌在CPPS和前列腺結(jié)

4、石中的病因作用，為臨床治療提供新的病原學(xué)依據(jù)。 結(jié)果： 1、標(biāo)本培養(yǎng)3-4周后觀察發(fā)現(xiàn)部分培養(yǎng)管底部出現(xiàn)緊貼管壁生長的白色沉淀。 2、單克隆抗體間接免疫熒光染色對納米細(xì)菌進(jìn)行鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CPPS患者組中29例前列腺液標(biāo)本中存在著納米細(xì)菌，陽性率為58％；而正常對照組中的前列腺液標(biāo)本僅有2例存在納米細(xì)菌，陽性率為4％。二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=34.08P＜0.01)。 3、單克隆抗體間接免疫熒光染色對

5、納米細(xì)菌進(jìn)行鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)26例結(jié)石標(biāo)本中有納米細(xì)菌存在，陽性率為65.0％。其中Ⅰ+Ⅳ組中6例有有納米細(xì)菌存在，陽性率為37.5％；Ⅱ+Ⅲ組中20例有納米細(xì)菌存在，陽性率為83.3％。兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=8.86P＜0.01)。 4、透射電鏡下觀察，納米細(xì)菌呈球狀或球棒狀，大小約100～500nm，絕大多數(shù)聚集成簇，菌體周圍有一層黑色的物質(zhì)包繞，并有羥基磷灰石分布；掃描電鏡下觀察，納米細(xì)菌成簇生長，形態(tài)呈不規(guī)則球形，

6、直徑200-800nm。 5、茜素紅染色觀察結(jié)果：細(xì)菌絕大多數(shù)聚集成簇，個(gè)體極其微小。 6、特異性片段的測序結(jié)果經(jīng)軟件與納米細(xì)菌16sRNA序列進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)相似度為98％：Score=2480bits(1290)，Expect=0.0，Identities=1387/1409(98％)，Gaps=4/1409(0％)，Strand=Plus/Plus。 結(jié)論及展望： 1、采用單克隆抗體間接免疫熒光染色對

7、納米細(xì)菌進(jìn)行鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CPPS患者組中納米細(xì)菌陽性率為58％；而正常對照組中的納米細(xì)菌陽性率為4％。二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=34.08P＜0.01)。表明Ⅲ型前列腺炎的發(fā)病與納米細(xì)菌的感染存在著密切的關(guān)系。 2、采用單克隆抗體間接免疫熒光染色對納米細(xì)菌進(jìn)行鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有26例前列腺結(jié)石標(biāo)本中存在著納米細(xì)菌，陽性率為65％。表明前列腺結(jié)石的發(fā)病與納米細(xì)菌的感染也存在著密切的關(guān)系。 3、在CPPS患者的前列腺液和前

8、列腺結(jié)石中提取出納米細(xì)菌的核酸成分，并與基因庫中納米細(xì)菌16SrRNA基因序列進(jìn)行比對，鑒定出納米細(xì)菌16SrRNA基因，為納米細(xì)菌在CPPS和前列腺結(jié)石發(fā)病中起重要作用提供進(jìn)一步的佐證。 4、納米細(xì)菌的培養(yǎng)周期很長，用形態(tài)學(xué)來進(jìn)行鑒定耗時(shí)長，而通過PCR法、T載體克隆和測序等手段鑒定納米細(xì)菌的16SrRNA基因就比較簡便，這就為納米細(xì)菌的鑒定提供了一條快速的檢測途徑，同時(shí)為研究納米細(xì)菌的礦化基因提供了一個(gè)研究基礎(chǔ)。 5