Ⅲ型前列腺炎患者納米細(xì)菌快速檢測方法的研究.pdf

1、背景及目的：
　　 根據(jù)1995年NIH分類，Ⅲ型前列腺炎即非細(xì)菌性前列腺炎，或者又稱慢性前列腺炎/ 慢性盆腔疼痛綜合癥(chronic prostatitis/ chronic pelvic cavity painsymptom，CP/CPPS)。區(qū)別于I 型、II 型前列腺炎是前列腺液(expressed prostatic secretion,EPS)鏡檢和培養(yǎng)均未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌，而IV 型前列腺炎為隱匿性前列腺炎。III 型前

2、列腺炎是男性的常見病，多發(fā)病，約占泌尿外科門診的1/4。但是病因不明確，因此治療效果不佳。近來人們針對III 型前列腺炎各種可能病因，如神經(jīng)系統(tǒng)、自身免疫、雄激素受體等相關(guān)因素，進(jìn)行了廣泛深入研究，但均未能取得一致結(jié)論，也不能合理解釋III型前列腺炎各種臨床癥狀及輔助檢查結(jié)果。臨床上常用抗生素、a-受體阻滯劑等藥物聯(lián)合治療III 行前列腺炎患者，并取得一定療效。因此，推測其可能存在一種未知病原微生物感染與III 型前列腺炎相關(guān)。諸多學(xué)者

3、經(jīng)過廣泛深入研究，發(fā)現(xiàn)一種新的病原微生物--納米細(xì)菌(nanobacteria)與III 型前列腺炎有密切關(guān)系，且進(jìn)一步相關(guān)動物實(shí)驗(yàn)等研究基本證實(shí)其為III 型前列腺炎一種病因。但是納米細(xì)菌獨(dú)特的生物學(xué)行為為其臨床檢測及實(shí)際應(yīng)用，指導(dǎo)臨床工作帶來了障礙。
　　 納米細(xì)菌是最近發(fā)現(xiàn)納米級病原微生物，呈球狀或桿狀，直徑約100-500nm。納米細(xì)菌在普通病原微生物培養(yǎng)條件不能生長，只能采用細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)增殖。納米細(xì)菌增殖周期較長，約

4、3-4周培養(yǎng)才能肉眼見到菌斑。而其獨(dú)特的生物礦化現(xiàn)象使其外周覆蓋一層由羥基磷灰石構(gòu)成堅硬的外殼。因此常規(guī)方法不能檢測，臨床檢測納米細(xì)菌更加困難。目前納米細(xì)菌檢測鑒定僅限定在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，而且基本都是培養(yǎng)增殖后檢測，無各種檢測方法綜合比較研究，更無臨床實(shí)際應(yīng)用及商品化的檢測手段。因此找尋一種可靠，快速的適用于III 前列腺炎的檢測方法，具有重要的臨床應(yīng)用價值。
　　 方法：
　　 1．本研究從臨床150例Ⅲ型前列腺炎患者的前

5、列腺液中過濾方法分離納米細(xì)菌，分別直接采用間接免疫熒光(indirect immunofluorescence staining，IIFS)、茜素紅鈣染色、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)基因擴(kuò)增等方法檢測及研究，并以培養(yǎng)后間接免疫熒光方法(indirect immunofluorescence staining after culture，IIFSC)為基準(zhǔn)，對各檢測方法進(jìn)行比較評價。

6、>　　 2．采用第一步篩選出的納米細(xì)菌快速檢測法對50例III 型前列腺炎患者進(jìn)行納米細(xì)菌檢測，并對檢出納米細(xì)菌感染患者予納米細(xì)菌敏感藥物四環(huán)素進(jìn)行診斷性治療，治療效果判定采用公認(rèn)的慢性前列腺癥狀評分(NIH-CPSI)標(biāo)準(zhǔn)。佐證該快速檢測方法臨床實(shí)際應(yīng)用可靠性。
　　 結(jié)果：
　　 1.培養(yǎng)結(jié)果及納米細(xì)菌IIFSC 鑒定結(jié)果：
　　 培養(yǎng)4周觀察，發(fā)現(xiàn)部分管底有納米細(xì)菌貼壁生長，出現(xiàn)白色沉淀。所有培養(yǎng)標(biāo)本離心

7、后用IIFSC 法鑒定納米細(xì)菌陽性83例，檢出率為55.3％。
　　 2.IIFS 法：納米細(xì)菌與小鼠的抗納米細(xì)菌單克隆抗體 8D10發(fā)生特異性結(jié)合，在熒光顯微鏡下可見陽性標(biāo)本有綠色的桿狀或顆粒分布納米細(xì)菌。150例檢測標(biāo)本納米細(xì)菌IIFS 法檢測有35例陽性，其檢出率為23.3％。以IIFSC 法為基準(zhǔn)，IIFS 法檢出靈敏度42.2％，特異度為100％。IIFS 法檢出率明顯低于IIFSC 法(P<0.05)。
　　

8、 3.茜素紅鈣染色檢測法：油鏡下觀察納米細(xì)菌體積極其微小，聚集成簇。150例標(biāo)本中有32例納米細(xì)菌茜素紅鈣染色法檢測陽性，陽性率為21.3％。以IIFSC 法為基準(zhǔn)，茜素紅鈣染色法的靈敏度34.9％，特異度為95.5％。茜素紅鈣染色檢出率也明顯低于IIFSC 法(P<0.05)。
　　 4.PCR 法：PCR 法擴(kuò)增納米細(xì)菌16S rRNA基因，陽性標(biāo)本可見1406bp 特異性條帶。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)克隆測序后與納米細(xì)菌16S rRNA

9、 序列比對相似性達(dá)97％。150例樣本中有86例納米細(xì)菌PCR 檢測陽性，其檢出率為57.3％。以IIFSC 法為基準(zhǔn)，PCR法檢測靈敏度95.2％，特異度為89.6％。PCR 法檢出率與IIFSC 法相當(dāng)(P>0.05)。
　　 5. 采用PCR 檢測法檢測臨床III 型前列腺炎新鮮前列腺液標(biāo)本50例，其中30例納米細(xì)菌感染陽性，納米細(xì)菌感染病人經(jīng)四環(huán)素抗納米細(xì)菌治療，其中1例失訪。治療總有效率為93.1％。治療前后CPSI總

10、評分下降程度為13.65±3.90，治療效果顯著(P<0.05)。這一結(jié)果基本佐證了PCR 快速檢測III 型前列腺炎納米細(xì)菌感染可靠性。
　　 結(jié)論及展望：
　　 1．III 型前列腺炎檢測納米細(xì)菌感染，常規(guī)間接免疫熒光、鈣染色檢測納米細(xì)菌靈敏度低，不適宜臨床應(yīng)用。
　　 2．III 型前列腺炎檢測納米細(xì)菌感染，PCR 法快速檢測納米細(xì)菌，其靈敏度及特異度均較好，能快速完成前列腺液標(biāo)本納米細(xì)菌檢測，基本符合臨床