獨(dú)一味抗炎鎮(zhèn)痛活性的研究.pdf

1、獨(dú)一味[Lamiophlomis rotata( Benth.) Kudo]是青藏高原特有的一種重要藥用植物，廣泛分布于西藏，在海拔3900-5100米的河灘地、石質(zhì)高山草甸或風(fēng)化的碎石灘上常能發(fā)現(xiàn)它的身影。其根及根莖或全草入藥，具有多種功效例如：消腫止痛、止血、抗菌消炎、活血化瘀、增強(qiáng)免疫力等。然而目前獨(dú)一味由于各產(chǎn)地及采收季節(jié)的不同而造成其品質(zhì)的差異，而且其不同有效部位的抗炎鎮(zhèn)痛比較也沒(méi)有系統(tǒng)研究，其抗神經(jīng)病理性疼痛作用及分子藥理學(xué)

2、機(jī)制尚未明確，因此本文通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及建立相應(yīng)的動(dòng)物模型，研究不同產(chǎn)地獨(dú)一味的質(zhì)量及抗炎活性、不同有效部位抗炎鎮(zhèn)痛的作用和獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷鎮(zhèn)痛作用，并初步探究了其作用機(jī)制。
　　采用高效液相法（HPLC）測(cè)得八種不同產(chǎn)地和季節(jié)的獨(dú)一味中山梔苷甲酯和8-O-乙酰山梔苷甲酯的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種成分的含量差異很大，甚至產(chǎn)自魯那菜康的獨(dú)一味不符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。建立了脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞（RAW264.7）炎癥模型，給予八種不同產(chǎn)

3、地和季節(jié)的獨(dú)一味乙醇提取物及對(duì)應(yīng)藥材中兩種成分相同含量和比例的山梔苷甲酯和8-O-乙酰山梔苷甲酯混合物12小時(shí)后，用Griess試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞的NO含量。結(jié)果表明不同藥材的乙醇提取物與對(duì)應(yīng)比例的混合物均具有相似的抗炎效果，進(jìn)一步對(duì)炎性因子研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)這兩種化合物的比例為1：1的時(shí)候抗炎效果最好。
　　分別采用角叉菜膠致大鼠足跖腫脹法、二甲苯致耳廓腫脹法和醋酸致熱板測(cè)痛法、小鼠扭體反應(yīng)探究獨(dú)一味中三類有效部位的抗炎、鎮(zhèn)痛活性。結(jié)果

4、顯示環(huán)烯醚萜苷類能明顯使小鼠熱板痛閾值增加，使在相同時(shí)間內(nèi)的小鼠扭體次數(shù)減少，苯乙醇苷類和黃酮類作用較弱且與環(huán)烯醚萜苷類比較有顯著性差異；環(huán)烯醚萜苷類對(duì)大鼠足跖腫脹和耳廓腫脹有明顯作用，黃酮類也能一定程度抑制耳廓腫脹，而苯乙醇苷類的作用較弱。這一研究表明獨(dú)一味三類主要有效部位中屬環(huán)烯醚萜苷類抗炎鎮(zhèn)痛效果較好，是獨(dú)一味的主要藥效部位。
　　環(huán)烯醚萜苷類是獨(dú)一味抗炎鎮(zhèn)痛作用的主要活性部位，然而它對(duì)神經(jīng)性疼痛的影響較少見(jiàn)報(bào)道。本文運(yùn)用加

5、速轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)（Accelerating rotarod Test，ARR）和自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)（Locomotor Activity Test）證實(shí)環(huán)烯醚萜苷類成分不影響大鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)和自主神經(jīng)。通過(guò)建立保留性神經(jīng)損傷（SNI）模型來(lái)研究環(huán)烯醚萜苷類成分對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的效應(yīng)，連續(xù)給藥14d。術(shù)前1d及術(shù)后隔日對(duì)每組均進(jìn)行疼痛行為學(xué)觀察，測(cè)量其機(jī)械性刺激反應(yīng)閾值（PMWT）。并在14天后測(cè)定其脊髓背角處一氧化氮（NO），腫瘤壞死因子-α（TNF-

6、α），白介素-1β（IL-1β)，白介素-10（IL-10），一氧化氮合酶（NOS）和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cGMP）的水平。采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)蛋白激酶G-Ⅰ（PKG-Ⅰ），誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的變化，運(yùn)用Western blot方法檢測(cè)N-甲基-D-天冬氨酸受體（NMDAR）和蛋白激酶Cγ（PKCγ）表達(dá)情況，并通過(guò)免疫組化法檢測(cè)PKCγ免疫反應(yīng)呈陽(yáng)性的情況。結(jié)果顯示獨(dú)一味環(huán)烯醚萜苷能降低SNI大鼠PMWT，下調(diào)背角處NO，IL