NFAT2對破骨細胞CAⅡ和V-ATPase基因表達的影響及低頻脈沖電磁場的干預研究.pdf

1、目的:研究低頻脈沖電磁場(PEMF)對去卵巢大鼠核因子κB受體活化因子(RANK)、活化T細胞核因子(NFATc1/NFAT2)、碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)、空泡型H+三磷酸腺苷轉(zhuǎn)運酶(Ⅴ-ATPase)基因表達的影響;研究NFAT2對CAⅡ和Ⅴ-ATPase基因表達的調(diào)控作用。
　　方法:1.選取48只雌性SD大鼠，分為三組，分別為SHAM（假手術）組、OVX（去卵巢）組、OVX+PEMF組，OVX+PEMF組隨機選一半被PEMF干預

2、14天和28天，測雌激素和骨密度。RT-PCR檢測NFAT2、RANK、CAⅡ和Ⅴ-ATPase基因的表達。
　　2.設計NFAT2-RNAi siRNA干擾序列，合成shRNA Oligo片段，將目的基因連接于干擾慢病毒骨架載體上。轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細胞STBL3，抽提陽性菌落并測序驗證。將重組慢病毒載體和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至293T細胞，收集濃縮病毒上清液，利用熒光法測定病毒滴度。選擇干擾效率最高的慢病毒進行后續(xù)實驗。
　　3.采

3、用4周齡SD大鼠提取骨髓基質(zhì)干細胞(BMSC)，誘導成破骨樣細胞(OLC)，加入不同干預，分為三組，分別為OLC對照組、VIVIT(NFAT2抑制劑)組、NFAT2iRNA慢病毒組，RT-PCR檢測NFAT2、CAⅡ和Ⅴ-ATPase基因的表達。
　　結(jié)果:1.OVX組BMD和E2顯著低于SHAM組（P＜0.001），PEMF干預28天后，OVX+PEMF組BMD明顯高于OVX組（P＜0.01）;OVX+PEMF組中RANK和Ⅴ-

4、ATPase的表達均低于相應OVX組;PEMF干預28天后，與OVX組對比，OVX+PEMF組CAⅡ和NFAT2基因表達顯著降低（P＜0.01)。
　　2.重組干擾慢病毒載體pL/shRNA/GFP-NFAT2序列經(jīng)鑒定，測序結(jié)果與Genebank中的基因序列比對顯示一致;干擾效率最高的慢病毒滴度為4×108TU/ml。
　　3.經(jīng)過不同干預后，VIVIT組和NFAT2iRNA慢病毒組的NFAT2、CAⅡ、Ⅴ-APase的基