CDC14B在牛卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育中的表達(dá)研究.pdf

1、細(xì)胞分裂周期蛋白14B(CDC14B)是絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶家族成員之一，其在真核生物中能夠下調(diào)CDK的活性，促進(jìn)細(xì)胞分裂和有絲分裂的退出，對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控具有重要作用。本研究檢測(cè)了牛卵母細(xì)胞成熟及胚胎早期發(fā)育過(guò)程中CDC14B的表達(dá)和定位。CDC14B的表達(dá)檢測(cè)結(jié)果表明，在卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中，CDC14B mRNA相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)水平在MⅡ期低于GV期。受精后，相對(duì)于MⅡ期，CDC14B mRNA表達(dá)在2-cell期、4-cel

2、l期和8-cell期有所增加，但仍低于GV期，到囊胚期降到最低;CDC14B蛋白表達(dá)水平在2-cell期有所增加，4-cell期、8-cell期明顯減少，到囊胚期CDC14B的表達(dá)再次增加。免疫熒光技術(shù)檢測(cè)CDC14B的定位，結(jié)果顯示，CDC14B在GV期無(wú)明顯定位，在A(yíng)I-TI、MⅡ期與紡錘體共定位。在2-cell期、4-cell期、8-cell期胚胎，主要定位于皮層、細(xì)胞間接觸部分和核周?chē)?。本研究結(jié)果表明，CDC14B在減數(shù)分裂過(guò)程

3、中與微管蛋白共定位，可能參與卵母細(xì)胞減數(shù)分裂調(diào)節(jié);而在早期胚胎發(fā)育中定位在皮層、細(xì)胞接觸部分和核周?chē)?，表明其參與有絲分裂的調(diào)節(jié)，并可能與卵裂中的胞質(zhì)分裂有關(guān)。
　　本研究構(gòu)建了CDC14B的過(guò)表達(dá)載體pCDC14B-cDNA-3.1(+)，利用電轉(zhuǎn)染法將過(guò)表達(dá)載體導(dǎo)入牛胎兒成纖維細(xì)胞，通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后牛胎兒成纖維細(xì)胞中CDC14BmRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示CDC14B mRNA表達(dá)升高。對(duì)過(guò)表達(dá)CDC14