纖維素表面多層定向固定化蛋白質(zhì).pdf

1、固定化酶技術(shù)最早主要出現(xiàn)在單酶固定化方面的研究，近幾年來(lái)越來(lái)越多的研究者開始研究多酶共固定化技術(shù)，然而無(wú)論是單酶還是多酶固定化都存在著固定化酶數(shù)量較少、固定化酶分子活性中心被隱藏等問題。因此本課題研究的目的是尋找一種新型高效固定化技術(shù)來(lái)解決上述存在的問題，同時(shí)給工業(yè)酶制劑多酶復(fù)合固定化提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。
　　實(shí)驗(yàn)選擇纖維素作為固定化載體，以綠色熒光蛋白GFP作為固定化目標(biāo)蛋白質(zhì)，借助基因重組技術(shù)手段構(gòu)建一套完整的多層定向自主

2、裝固定化體系，并且在該體系中引入支架蛋白作為載體與目標(biāo)蛋白的連接橋梁。該課題有兩大創(chuàng)新點(diǎn)，第一點(diǎn)是載體表面的每個(gè)支架蛋白不僅可以固定至少兩倍的目標(biāo)蛋白，還可以調(diào)控該支架蛋白的長(zhǎng)度來(lái)間接控制目標(biāo)蛋白的數(shù)量;第二點(diǎn)是支架蛋白與固定化目標(biāo)蛋白能夠特異性定向的親和結(jié)合，從而避免固定化目標(biāo)蛋白活性位點(diǎn)被破壞的可能性。該實(shí)驗(yàn)首先利用支架蛋白末端的纖維素結(jié)合域與載體表面進(jìn)行親和吸附，然后通過(guò)支架蛋白上的每個(gè)位點(diǎn)基于錨定域與粘合域的親和作用方式再次固定