基于電化學工作站對G蛋白級聯(lián)放大系統(tǒng)的篩選.pdf

1、現(xiàn)在對昆蟲嗅覺研究的模型選擇柞蠶，這是由于雄性蠶蛾對雌性蠶蛾所分泌出來的性信息素有非常好的特異性和敏感度。在所有的鱗翅目昆蟲基因組序列當中，第一個被公布的是柞蠶基因組序列，而且在柞蠶觸角中，有6個ORs已經(jīng)被確定為對性信息素有反應，譬如說已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的嗅覺受體基因BmOR1，它就屬于與性信息素相關蛋白，而且這種受體一般會在雄蠶的觸角中大量地表達，因為它對柞蠶醇和柞蠶醛這兩種性信息素有特異性反應。
　　本研究以自組裝柞蠶觸角嗅覺受體蛋白

2、前后的豬、牛的味覺上皮粘膜組織（即味蕾組織）、鯰魚的嗅覺細胞和酵母細胞為傳感器的敏感元件，通過核微孔膜固定細胞，然后將其與玻碳電極相連，通過電化學工作站測定蠶蛾醇受體經(jīng)過不同濃度的蠶蛾醇刺激后的響應電流，再計算電流的變化率。結果表明自組裝柞蠶觸角嗅覺受體蛋白前后豬、牛、鯰魚、酵母對蠶蛾醇的最低檢測限為1×10-13 mol/L，豬味蕾測定結果的線性關系：y=2.0905x+48.717，R2=0.9185；牛味蕾測定結果的線性關系：y=

3、4.3731x+26.572，R2=0.9537；酵母細胞測定結果的線性關系：y=2.7805x+35.789，R2=0.8659；鯰魚嗅覺細胞測定結果的線性關系：y=6.4399x+16.234，R2=0.9679。苦味作為5種基本味覺感受之一，它的主要作用是作為一種防御機制，避免動物或人攝入有毒物質(zhì)，它在動物的長期進化過程中起到了關鍵的作用。由于不同動物具有不同的取食偏好和生存環(huán)境，所以動物對苦味的識別能力在長期進化過程中產(chǎn)生了很大

4、的分化。動物對苦味的識別首先是由于苦味物質(zhì)和苦味受體的結合，所以對苦味受體與不同苦味分子的研究成為對苦味研究的重要基礎。
　　本研究利用海藻酸鈉-CaCl2凝膠作固定劑，將豬的味蕾組織固定到兩片核微孔膜中間制成―三明治式味覺傳感膜，然后將其固定到玻碳電極上制成味覺生物傳感電極，通過電化學工作站測定出蔗糖八乙酸酯、苯甲地那銨和槲皮素刺激其相應受體后的響應電流，結果表明：該傳感器對蔗糖八乙酸酯、苯甲地那銨和槲皮素的最低檢測限分別為1×

5、10-14、1×10-13 mol/L和1×10-14 mol/L，在其濃度分別為1×10-8、1×10-6 mol/L和1×10-9 mol/L時其電流變化率都相應的達到最大值，說明此時它們的受體已經(jīng)被飽和。蔗糖八乙酸酯在其濃度為1×10-14~1×10-11 mol/L有較好的對數(shù)關系（R2=0.9573），苯甲地那銨在其濃度為1×10-13~1×10-7 mol/L有很好的對數(shù)關系（R2=0.9873），而槲皮素在其濃度為1×10

6、-14~1×10-9 mol/L對數(shù)關系比較好（R2=0.9964）。該傳感器不但可以定量化地測定出苦味物質(zhì)和味覺受體之間的作用規(guī)律，也會為今后對配體受體作用規(guī)律的研究提供新的思路。對味覺組織傳感器的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性及選擇性進行了研究，結果表明：味覺組織傳感器至少可以穩(wěn)定保存7天；將制備好的味覺生物傳感器在10-5 mol/L的蔗糖八乙酸酯溶液中連續(xù)不斷地測量10次，然后計算其相對標準偏差為5.34％，說明該味覺生物傳感器的穩(wěn)定性還是比較