基于電化學(xué)工作站對(duì)G蛋白級(jí)聯(lián)放大系統(tǒng)的篩選.pdf

1、現(xiàn)在對(duì)昆蟲嗅覺(jué)研究的模型選擇柞蠶，這是由于雄性蠶蛾對(duì)雌性蠶蛾所分泌出來(lái)的性信息素有非常好的特異性和敏感度。在所有的鱗翅目昆蟲基因組序列當(dāng)中，第一個(gè)被公布的是柞蠶基因組序列，而且在柞蠶觸角中，有6個(gè)ORs已經(jīng)被確定為對(duì)性信息素有反應(yīng)，譬如說(shuō)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的嗅覺(jué)受體基因BmOR1，它就屬于與性信息素相關(guān)蛋白，而且這種受體一般會(huì)在雄蠶的觸角中大量地表達(dá)，因?yàn)樗鼘?duì)柞蠶醇和柞蠶醛這兩種性信息素有特異性反應(yīng)。
　　本研究以自組裝柞蠶觸角嗅覺(jué)受體蛋白

2、前后的豬、牛的味覺(jué)上皮粘膜組織（即味蕾組織）、鯰魚的嗅覺(jué)細(xì)胞和酵母細(xì)胞為傳感器的敏感元件，通過(guò)核微孔膜固定細(xì)胞，然后將其與玻碳電極相連，通過(guò)電化學(xué)工作站測(cè)定蠶蛾醇受體經(jīng)過(guò)不同濃度的蠶蛾醇刺激后的響應(yīng)電流，再計(jì)算電流的變化率。結(jié)果表明自組裝柞蠶觸角嗅覺(jué)受體蛋白前后豬、牛、鯰魚、酵母對(duì)蠶蛾醇的最低檢測(cè)限為1×10-13 mol/L，豬味蕾測(cè)定結(jié)果的線性關(guān)系：y=2.0905x+48.717，R2=0.9185；牛味蕾測(cè)定結(jié)果的線性關(guān)系：y=

3、4.3731x+26.572，R2=0.9537；酵母細(xì)胞測(cè)定結(jié)果的線性關(guān)系：y=2.7805x+35.789，R2=0.8659；鯰魚嗅覺(jué)細(xì)胞測(cè)定結(jié)果的線性關(guān)系：y=6.4399x+16.234，R2=0.9679?？辔蹲鳛?種基本味覺(jué)感受之一，它的主要作用是作為一種防御機(jī)制，避免動(dòng)物或人攝入有毒物質(zhì)，它在動(dòng)物的長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中起到了關(guān)鍵的作用。由于不同動(dòng)物具有不同的取食偏好和生存環(huán)境，所以動(dòng)物對(duì)苦味的識(shí)別能力在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中產(chǎn)生了很大

4、的分化。動(dòng)物對(duì)苦味的識(shí)別首先是由于苦味物質(zhì)和苦味受體的結(jié)合，所以對(duì)苦味受體與不同苦味分子的研究成為對(duì)苦味研究的重要基礎(chǔ)。
　　本研究利用海藻酸鈉-CaCl2凝膠作固定劑，將豬的味蕾組織固定到兩片核微孔膜中間制成―三明治式味覺(jué)傳感膜，然后將其固定到玻碳電極上制成味覺(jué)生物傳感電極，通過(guò)電化學(xué)工作站測(cè)定出蔗糖八乙酸酯、苯甲地那銨和槲皮素刺激其相應(yīng)受體后的響應(yīng)電流，結(jié)果表明：該傳感器對(duì)蔗糖八乙酸酯、苯甲地那銨和槲皮素的最低檢測(cè)限分別為1×

5、10-14、1×10-13 mol/L和1×10-14 mol/L，在其濃度分別為1×10-8、1×10-6 mol/L和1×10-9 mol/L時(shí)其電流變化率都相應(yīng)的達(dá)到最大值，說(shuō)明此時(shí)它們的受體已經(jīng)被飽和。蔗糖八乙酸酯在其濃度為1×10-14~1×10-11 mol/L有較好的對(duì)數(shù)關(guān)系（R2=0.9573），苯甲地那銨在其濃度為1×10-13~1×10-7 mol/L有很好的對(duì)數(shù)關(guān)系（R2=0.9873），而槲皮素在其濃度為1×10

6、-14~1×10-9 mol/L對(duì)數(shù)關(guān)系比較好（R2=0.9964）。該傳感器不但可以定量化地測(cè)定出苦味物質(zhì)和味覺(jué)受體之間的作用規(guī)律，也會(huì)為今后對(duì)配體受體作用規(guī)律的研究提供新的思路。對(duì)味覺(jué)組織傳感器的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性及選擇性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：味覺(jué)組織傳感器至少可以穩(wěn)定保存7天；將制備好的味覺(jué)生物傳感器在10-5 mol/L的蔗糖八乙酸酯溶液中連續(xù)不斷地測(cè)量10次，然后計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.34％，說(shuō)明該味覺(jué)生物傳感器的穩(wěn)定性還是比較