強化磷酸三鈣-富血小板血漿凝膠復(fù)合支架材料的制備及在體內(nèi)成骨的研究.pdf

1、創(chuàng)傷、骨腫瘤手術(shù)切除造成的骨缺損，使得現(xiàn)有的骨替代材料已經(jīng)無法滿足臨床需求。骨組織工程當(dāng)今研究的重點，是一種開發(fā)能夠修復(fù)、維持和改善損傷骨組織功能可被機體吸收的生物替代物來解決大段骨缺損的方法。人們逐步認識到構(gòu)建以支架材料為骨架，復(fù)合干細胞，輔以生長因子的細胞繁殖三角模式是組織工程較理想的選擇。本課題根據(jù)骨組織工程的基本原理，設(shè)計將富血小板血漿與強化磷酸三鈣復(fù)合后加入凝血酶形成復(fù)合材料，構(gòu)建新型強化磷酸三鈣-膠原-多種生長因子(PRP)

2、復(fù)合支架，隨后選擇和培養(yǎng)犬骨髓間充質(zhì)干細胞并將種子細胞與支架相復(fù)合，植入比格犬體內(nèi)觀察其成骨情況，為構(gòu)建理想的初步組織工程骨工程化產(chǎn)品，為建立骨組織工程的大型動物模型及進一步滿足治療骨缺損的臨床需要提供理論基礎(chǔ)。 目的:研究探討犬骨髓間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)方法，以及生長增殖特性，并將其作為骨組織工程種子細胞的實驗基礎(chǔ)。 方法:無菌技術(shù)抽取比格犬骨髓，密度梯度離心法獲取細胞。加入含胎牛血清體積分數(shù)為0.1的低糖DMEM培

3、養(yǎng)基中進行原代培養(yǎng)；待細胞生長至80～90％融合時，1:3傳代培養(yǎng)。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)。MTT法測定3、5、10代細胞生長曲線。流式細胞儀檢測第5代細胞的表面抗原分子。 結(jié)果:原代培養(yǎng)后24小時看見微少貼壁細胞，初起為小圓形，48小時后可見短梭形、梭形和多角形貼壁細胞，有初起克隆集落形成，并可見細胞分裂相；3天后可見梭形類成纖維細胞明顯增多，5天左右進入對數(shù)生長期，8～10天單層細胞融合接近90％，呈漩渦樣生長。1:3傳代的

4、細胞2小時左右即可見細胞貼壁，一般10小時左右完成貼壁，生長增快，多數(shù)為類成纖維細胞，圓形細胞逐漸減少，6～7天細胞即可單層融合，傳3代以后細胞形態(tài)均一，呈長梭形，接近融合狀態(tài)時可呈漩渦樣生長。10代以后細胞則逐漸有寬大梭形樣變，增殖逐漸減緩，偶有細胞飄零。流式細胞儀檢測傳5代細胞有96％表達CD44，95％表達CD29，而只有5％表達CD34。生長曲線顯示傳3、5代骨髓間充質(zhì)干細胞均有較強的增殖能力，其中傳3代細胞更為明顯，而傳10代