均相電化學DNA生物傳感器的構(gòu)筑及其在藥物分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、隨著經(jīng)濟的不斷發(fā)展，人們的飲食文化日益豐富，食品安全問題受到廣泛關(guān)注。農(nóng)藥和獸藥的濫用使得藥物殘留問題日益嚴重，進而威脅到人類健康。所以，對農(nóng)藥和獸藥的殘留分析具有非常重要的意義。因具有簡單、靈敏、快速、成本低等優(yōu)點，電化學 DNA生物傳感器目前已經(jīng)在食品安全、醫(yī)學、環(huán)境等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。在查閱大量文獻和相關(guān)研究的基礎(chǔ)上，本文通過設(shè)計發(fā)卡探針，借助目標與發(fā)卡探針的相互作用導致 DNA構(gòu)型變化，發(fā)展了新型的均相、免固定的電化學DNA生

2、物傳感器，具體內(nèi)容如下：
　　首先，基于有機磷農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制作用，建立了新型有機磷農(nóng)藥的均相電化學生物傳感新方法。當汞離子存在時，末端標記電化學活性物質(zhì)亞甲基藍（MB）的發(fā)卡（HP）探針，通過 T-Hg2+-T堿基配對可折疊成莖環(huán)發(fā)卡結(jié)構(gòu)，此狀態(tài)下可以阻止核酸外切酶I的水解，因為HP和帶負電荷的ITO電極之間有很大的靜電排斥，MB遠離電極表面所以產(chǎn)生的電化學信號很小。乙酰膽堿酯酶水解硫代乙酰膽堿生成膽堿，膽堿帶有的巰基（

3、-SH）與HP探針中汞離子結(jié)合，HP探針的發(fā)卡結(jié)構(gòu)被破壞，核酸外切酶I發(fā)揮作用水解單鏈DNA從而產(chǎn)生單核苷酸，單核苷酸和ITO之間的靜電排斥力非常弱，MB容易擴散至電極表面導致電化學響應(yīng)增加。有機磷農(nóng)藥抑制乙酰膽堿酯酶的活性，導致水解產(chǎn)物中帶巰基的膽堿量減少，電化學信號也隨之降低。本實驗以二嗪磷作為目標分析物，在最佳實驗條件下，二嗪磷的檢測限可以達到0.25μg L-1。實驗結(jié)果表明這個方法檢測實際樣品中的有機磷農(nóng)藥殘留有很大的潛力，期

4、望能夠用于生化分析和食品安全領(lǐng)域。
　　其次，利用目標物引導和T7核酸外切酶輔助的雙循環(huán)信號放大策略，設(shè)計了一個高靈敏和高特異性的均相電化學適體傳感器用于抗生素的殘留的分析檢測?；诎l(fā)卡探針和單核苷酸對帶負電荷的ITO電極擴散率的顯著不同差異實現(xiàn)目標物的分析檢測。在實驗中選擇氨芐青霉素作為目標分析物，檢驗該體系的分析性能。實驗結(jié)果表明該體系對氨芐青霉素具有良好的選擇性，檢測限可達4.0 pM，并成功應(yīng)用于牛奶中抗生素殘留的檢測。另