醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對(duì)大鼠血腦脊液屏障損傷的比較研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討比較醋酸鉛與納米硫化鉛暴露后對(duì)大鼠血腦脊液屏障的物理屏障功能和免疫監(jiān)視功能的損傷的不同，為不同類型的鉛中毒防治提供理論依據(jù)。
　　方法： SPF級(jí)SD雄性大鼠81只隨機(jī)分為對(duì)照組、醋酸鉛組（20mg/kg）和納米硫化鉛（nano-pbS）組（20mg/kg），每組27只。染毒方法為灌胃，染毒時(shí)間為9周。應(yīng)用Morris水迷宮檢測大鼠的學(xué)習(xí)與記憶功能；運(yùn)用ELISA法檢測實(shí)驗(yàn)大鼠血清以及腦脊液中白蛋白、白細(xì)胞介素

2、-4（IL-4）、干擾素-γ（IFN-γ）、CXCL10含量，并計(jì)算出腦脊液白蛋白指數(shù)；激光共聚焦熒光免疫方法檢測脈絡(luò)叢胞質(zhì)附著蛋白-1（ZO-1）、閉合蛋白（Occludin）、血管內(nèi)皮表達(dá)粘附分子（ICAM-1）熒光表達(dá)分布；采用real-time PCR方法檢測實(shí)驗(yàn)大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1、Occludin、IL-4、IFN-γ、CXCL10和ICAM-1的mRNA的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測實(shí)驗(yàn)大鼠全血和腦脊液中CD4+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量；

3、應(yīng)用透射電鏡對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠的脈絡(luò)叢組織上皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。
　　結(jié)果：1實(shí)驗(yàn)大鼠的生長發(fā)育情況：在醋酸鉛與納米硫化鉛染毒期間，所有實(shí)驗(yàn)大鼠體重未見明顯差異。2醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響：與對(duì)照組比較，醋酸鉛與納米硫化鉛染毒后，第四天，兩染毒組大鼠的逃逸潛伏期均延長，納米硫化鉛組比醋酸鉛組延長32.89％（P<0.05），兩個(gè)染毒組大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)均有所下降（P<0.05），組間比較無顯著差異。3醋酸鉛與納

4、米硫化鉛暴露對(duì)大鼠血清及腦脊液中白蛋白、IL-4、IFN-γ、CXCL10含量的影響：醋酸鉛組和納米硫化鉛組而腦脊液中白蛋白含量較對(duì)照組分別升高25.18%和47.70%，納米硫化鉛組比醋酸鉛組升高17.98%（P<0.05），兩組腦脊液白蛋白指數(shù)均較對(duì)照組升高，且納米硫化鉛組升高更明顯（P<0.05）；與對(duì)照組比較，醋酸鉛組與納米硫化鉛組細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ的含量增加，CXCL10含量降低。其中，醋酸鉛組與納米硫化鉛組血清中細(xì)

5、胞因子 IL-4、IFN-γ含量較對(duì)照組分別升高[72.13%、93.56%]和[54.61%、43.50%]，CXCL10含量分別降低了43.11%和53.44%（P<0.05）,但納米鉛組與醋酸鉛組比較無明顯不同。腦脊液中，醋酸鉛組與納米硫化鉛組細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ和CXCL10與血清中變化趨勢相同。其中，納米硫化鉛組腦脊液中IL-4比醋酸鉛組低13.60%, IFN-γ含量比醋酸鉛組升高205.06%（P<0.05）。4醋

6、酸鉛與納米硫化鉛暴露對(duì)大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1、Occludin、ICAM-1和CD4+T淋巴細(xì)胞分布的影響：對(duì)照組大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1呈連續(xù)線狀環(huán)形分布，熒光較強(qiáng)。醋酸鉛組、納米硫化鉛組大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1熒光減弱，分布呈不連續(xù)性，納米硫化鉛組較醋酸鉛組更為顯著；醋酸鉛組、納米硫化鉛組大鼠脈絡(luò)叢緊密連接蛋白Occludin邊緣熒光與對(duì)照組比較減弱。納米硫化鉛組比醋酸鉛組表達(dá)下降幅度大；對(duì)照組中， ICAM-1的熒光呈不連續(xù)性，醋酸鉛與納米

7、硫化鉛組脈絡(luò)叢中ICAM-1的熒光強(qiáng)度均較對(duì)照組增強(qiáng)，納米硫化鉛組更明顯。5醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對(duì)大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1、Occludin、IL-4、IFN-γ、CXCL10和ICAM-1的mRNA的表達(dá)的影響：與對(duì)照組比較，醋酸鉛組與納米硫化鉛組緊密連接蛋白ZO-1、Occludin mRNA相對(duì)表達(dá)量均呈下降趨勢（P<0.05），納米硫化鉛組緊密連接蛋白ZO-1、Occludin mRNA相對(duì)表達(dá)量比醋酸鉛組分別下降了59.37%，

8、11.90%（P<0.05）；與對(duì)照組比較，醋酸鉛與納米硫化鉛暴露后，脈絡(luò)叢中ICAM-1、IL-4、IFN-γ的mRNA的表達(dá)結(jié)果升高，醋酸鉛與納米硫化鉛組CXCL10蛋白的 mRNA的表達(dá)結(jié)果較對(duì)照組降低，納米硫化鉛組的ICAM-1、IL-4和CXCL10的mRNA的表達(dá)分別比醋酸鉛組高31.19%、72.57%和42.86%， IFN-γ mRNA的表達(dá)比醋酸鉛組降低21.63%（P<0.05）。6醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對(duì)大鼠血液

9、及腦脊液中CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響流：醋酸鉛組大鼠全血中CD4+T淋巴細(xì)胞以及醋酸鉛組與納米硫化鉛組腦脊液中CD4+T淋巴細(xì)胞比例均較對(duì)照組增加（P<0.05）。7醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對(duì)大鼠脈絡(luò)叢超微結(jié)構(gòu)的影響：觀察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組脈絡(luò)叢組織微絨毛濃密，排列緊密；線粒體形態(tài)正常；細(xì)胞之間的緊密連接結(jié)構(gòu)呈完整性，清晰可見。而醋酸鉛組與納米硫化鉛染毒組脈絡(luò)叢組織微絨毛缺失稀少，排列雜亂無序；線粒體呈腫大及空泡樣改變，且納米硫化鉛組線粒體形態(tài)