大鼠脊髓損傷后血-脊髓屏障的變化及其與繼發(fā)性損傷關(guān)系的研究.pdf

1、脊髓損傷（spinal cord injury, SCI）往往造成患者的終生癱瘓，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。因而，對(duì)SCI后病理變化機(jī)制及其相關(guān)研究一直是學(xué)者們所關(guān)注的熱點(diǎn)與難點(diǎn)。SCI后血管和神經(jīng)組織的機(jī)械性損壞和斷裂引起原發(fā)性損傷，繼而引發(fā)出血、炎癥、興奮性毒性等一系列復(fù)雜的損傷過(guò)程，導(dǎo)致繼發(fā)性損傷的進(jìn)一步擴(kuò)大。其中原發(fā)性損傷中血管的損害可直接引起血-脊髓屏障(blood spinal cord barrier，BSCB)的破壞，而

2、BSCB的破壞導(dǎo)致血液中的各種分子進(jìn)入脊髓實(shí)質(zhì)，造成脊髓組織水腫、缺血缺氧、炎癥以及脊髓血液灌注的改變，進(jìn)一步加重脊髓的損傷。由于BSCB在脊髓損傷過(guò)程中的重要性，人們對(duì)其進(jìn)行了大量的研究，但是脊髓損傷后BSCB的變化及其與繼發(fā)性損傷的關(guān)系目前尚未完全清楚。為此，我們以大鼠脊髓撞擊傷為模型，研究了SCI后BSCB的變化以及其與繼發(fā)性損傷的關(guān)系。 本實(shí)驗(yàn)分為兩部分。第一部分研究了用免疫球蛋白G（IgG）免疫組織化學(xué)染色研究SCI后

3、BSCB的變化。在以往的實(shí)驗(yàn)中一般采用示蹤劑注射的方法研究SCI后BSCB的通透性變化，但此方法操作復(fù)雜，并且會(huì)影響其他形態(tài)的觀察。為了尋找簡(jiǎn)潔可靠的方法，本實(shí)驗(yàn)采用IgG免疫組織化學(xué)方法染色，顯示BSCB對(duì)內(nèi)源性IgG的通透性。Evans Blue(EB)是研究BSCB的一種常用示蹤劑，我們比較了SCI后0 h、8h、24h、72h、1w各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的IgG染色范圍和EB分布范圍。結(jié)果表明，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，IgG的染色范圍(mm)為：7.

4、14±0.50、11.43±1.63、9.48±1.71、9.82±0.63、5.59±0.55，EB的分布范圍為：7.2±0.51、11.25±1.60、9.27±1.65、9.42±0.54、5.58±0.48，二者在頭尾方向上的分布幾乎重合。因而IgG染色可作為評(píng)估BSCB通透性的一項(xiàng)方便可靠的方法。 第二部分，我們采用上述IgG免疫組織化學(xué)染色評(píng)估SCI后BSCB的變化。對(duì)于組織繼發(fā)性損傷的發(fā)展，我們采用HE染色評(píng)估組織

5、受損的范圍，采用NeuN免疫組織化學(xué)染色評(píng)估神經(jīng)元壞死的范圍。并比較了IgG染色范圍與上述組織損傷范圍的變化。 在損傷后0 h、4 h、8 h、24 h、72 h、1 w各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，組織的損傷范圍（mm）分別為3.64±0.92、6.03±0.47、7.04±0.42、7.11±0.53、9.32±0.17、8.63±0.31，IgG陽(yáng)性范圍分別為7.27±0.43、7.74±0.53、11.43±1.60、9.48±1.65、

6、9.90±0.60、5.55±0.40。IgG陽(yáng)性區(qū)域事實(shí)上包括了BSCB破壞的范圍和IgG擴(kuò)散的范圍。在0 h-72 h之間，繼發(fā)性損傷范圍不斷增加，IgG范圍也呈現(xiàn)不斷增加的趨勢(shì)，其中在8 h時(shí)達(dá)到一個(gè)高峰。在72 h到1 w之間，組織損傷范圍變化不明顯，而IgG的范圍則明顯減?。╬<0.05）。 為進(jìn)一步研究BSCB與繼發(fā)性損傷的關(guān)系，我們研究了SCI后神經(jīng)元壞死的情況。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，損傷后0 h在損傷區(qū)以及附近的大量

7、神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)IgG。為此我們研究了這些0 h和4 h時(shí)IgG陽(yáng)性神經(jīng)元以及存活神經(jīng)元的分布。結(jié)果4 h時(shí)，IgG陽(yáng)性神經(jīng)元已消失，且存活神經(jīng)元的分布與0 h時(shí)非IgG陽(yáng)性神經(jīng)元的分布一致。提示這些IgG陽(yáng)性神經(jīng)元已經(jīng)死亡。而在HE和尼氏染色中，IgG陽(yáng)性神經(jīng)元未見(jiàn)明顯的壞死特征。0 h時(shí)神經(jīng)元的壞死范圍(mm)約為1.06±0.21，到4 h時(shí)明顯擴(kuò)大為4.73±0.27（p<0.05）。損傷后8 h、24 h、72 h、1 w神經(jīng)元的

8、壞死范圍分別為4.99±0.81、5.22±0.85、5.91±0.07、6.42±0.32，神經(jīng)元壞死的范圍變化不明顯（p>0.05）。故NYU撞擊傷后，神經(jīng)元的壞死主要發(fā)生于24 h之內(nèi)，早期的神經(jīng)元壞死可能是由于機(jī)械性的損傷所致。 綜上所述，利用IgG染色指示BSCB對(duì)內(nèi)源性IgG的通透性，具有較多優(yōu)勢(shì)，可作為評(píng)估NYU脊髓損傷后BSCB通透性的一個(gè)方便可靠的指標(biāo)。SCI后BSCB破壞的范圍在72 h之內(nèi)隨著繼發(fā)性損傷范圍