β2-微球蛋白抗體吸附劑的合成及性能評(píng)價(jià).pdf

1、β2M是主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)Ⅰ類分子的輕鏈，參與細(xì)胞間相互識(shí)別及免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)。然而，在腎衰患者體內(nèi)β2M不能被正常代謝，積累在血液中成為毒素，并產(chǎn)生各類并發(fā)癥。目前針對(duì)高β2M血癥并發(fā)癥的治療方法有藥物治療和外科手術(shù)，這兩種方法只能緩解疼痛和修復(fù)損傷，且有很大副作用。血液凈化方式能從根源上降低腎衰患者血液中的β2M水平，因此被認(rèn)為是治療β2M血癥最有效的方式之

2、一。而現(xiàn)有的血液凈化材料對(duì)β2M吸附選擇性過低，在治療的同時(shí)丟失了很多對(duì)人體有益的其它分子。本論文利用親和能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好的特異性卵黃抗體IgY為配基制備親和吸附劑，并進(jìn)行性能評(píng)價(jià);同時(shí)，也表達(dá)了抗β2M的二價(jià)納米抗體并對(duì)其進(jìn)行親和純化和活性驗(yàn)證，證明了將其應(yīng)用于血液凈化治療β2M血癥的可行性。本論文研究內(nèi)容分為以下三部分:
　　(1) IgY的獲得與純化。利用已獲得的β2M溶液為抗原免疫蛋雞，提取卵黃上清液并進(jìn)行粗分離，利用兩種

3、不同路徑合成的Sepharose-β2M吸附劑對(duì)IgY進(jìn)行親和純化，第二種吸附劑純化效果明顯優(yōu)于第一種，純化后IgY效價(jià)可提高80倍。
　　(2) IgY吸附劑的合成及性能評(píng)價(jià)。利用純化后的IgY為配基，通過兩種不同路徑合成吸附劑Ⅰ和Ⅱ，分別測(cè)定其對(duì)β2M結(jié)合能力:親和常數(shù)分別為7.06×106L/mol和1.84×106L/mol，均具有良好的親和能力;兩種吸附劑重復(fù)使用5次后其對(duì)β2M吸附能力仍然穩(wěn)定，飽和吸附量分別維持在50

4、μg/mL和35μg/mL以上;將兩種吸附劑分別用0.01M NaOH溶液和1mM稀HCl溶液浸泡12h后，用間接ELISA法測(cè)定上清液的A450值與空白對(duì)照基本相等，配基無脫落且其飽和吸附量不變;此外，兩種吸附劑對(duì)血清中其他非特異性組分不產(chǎn)生明顯吸附。
　　(3)二價(jià)納米抗體的原核表達(dá)及活性驗(yàn)證。將重組質(zhì)粒pET23a-β2M轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE3)，經(jīng)活化、誘導(dǎo)后得到表達(dá)。目的蛋白分子量約為30kDa，表達(dá)形式為包涵體