抗體選擇性吸附材料的合成及性能評(píng)價(jià).pdf

1、抗體(antibody)既是提高人體免疫力的關(guān)鍵蛋白，也是導(dǎo)致自身免疫性疾病的重要致病因子，目前將選擇性純化抗體的層析技術(shù)用于血液凈化已成為治療自身免疫性疾病的重要手段。研究表明，以疏水性化合物為配基的層析材料對(duì)抗體有一定的選擇吸附能力。本文選用16種功能分子即正丁胺、哌啶、芐胺、酪胺、3-氯-4-羥基-苯乙酸、N,N-二甲基乙二胺、N,N-二甲基丙二胺、甲基哌嗪、苯三羧酸、4-(3-氨丙基)嗎啡啉、4-氨基苯磺酰胺、4-甲氨基吡啶、吲

2、哚乙酸、4-巰基-乙基-吡啶(4-MEP)、磺胺甲氧噠嗪、硫嗎啉為配基，運(yùn)用三種不同的活化方法將其固定到交聯(lián)瓊脂糖凝膠表面合成吸附材料。評(píng)價(jià)它們?cè)谏砣芤簵l件下對(duì)IgG的動(dòng)態(tài)結(jié)合容量以及吸附選擇性，探討了配基的化學(xué)結(jié)構(gòu)及載體的活化密度等因素對(duì)吸附材料抗體吸附性能的影響。獲得了如下研究結(jié)果： (1)吸附材料的活化密度對(duì)其吸附IgG能力會(huì)產(chǎn)生較大的影響。實(shí)驗(yàn)表明其對(duì)IgG的動(dòng)態(tài)結(jié)合容量隨活化密度的增加而增加。通過對(duì)lgO分子三級(jí)結(jié)構(gòu)

3、的分析，研究發(fā)現(xiàn)吸附材料在生理溶液條件下通過多點(diǎn)作用方式結(jié)合于IgG分子表面較平坦的疏水殘基相對(duì)集中的區(qū)域，產(chǎn)生穩(wěn)定的吸附作用，增加的配基能夠?qū)ξ阶饔昧Φ膶?shí)際增加產(chǎn)生貢獻(xiàn)。 (2)在16種吸附材料中，純蛋白體系條件下有6種吸附材料對(duì)IgG具有較高的動(dòng)態(tài)結(jié)合容量(Q>10 mg/mL gel)。其中吲哚乙酸吸附材料對(duì)IgG的動(dòng)態(tài)結(jié)合容量最高，達(dá)到37.5 mg/l gel；其次為4-MEP吸附材料達(dá)到21.7 mg/ml gel

4、。所有的吸附材料均沒有表現(xiàn)出對(duì)HSA強(qiáng)烈的吸附作用。 (3)為了考察吸附材料對(duì)IgG的選擇吸附能力，選擇血漿中高豐度蛋白HSA為對(duì)照，在37℃、pH7.4，0.01 mol/L磷酸鹽的緩沖液(PBS)中，分別測(cè)定上述吸附材料對(duì)IgG和HSA的吸附常數(shù)(KalgG、KaHSA)，利用IgG和HSA的吸附常數(shù)之比(KalgG/kaHSA)判定其選擇性。結(jié)果表明有7種吸附材料：芐胺吸附材料、正丁胺吸附材料、酪胺吸附材料、硫嗎啉吸附材料

5、、3-氯-4-羥基-苯乙酸吸附材料、吲哚乙酸吸附材料、4-MEP吸附材料的KalgG/KaHSA>10，表明它們對(duì)抗體具有吸附選擇性。 (4)在以上研究基礎(chǔ)上，選取6種對(duì)IgG具有較高動(dòng)態(tài)結(jié)合容量及吸附選擇性的吸附材料，研究其對(duì)人血漿這種復(fù)雜體系中抗體的吸附能力。結(jié)果表明在復(fù)雜體系中除了4-MEP吸附材料以外，其他吸附材料對(duì)抗體的吸附容量都有較大程度的下降，其中最為明顯的是吲哚乙酸吸附材料(從37.5 mg/ml gel下降為7