新型納米稀土時間分辨熒光探針的制備與應用.pdf

1、稀土熒光探針具有熒光壽命長、Stokes位移大、發(fā)射峰尖銳等優(yōu)點，結(jié)合時間分辨熒光測定技術(shù)可有效去除背景熒光的干擾，在復雜生物及環(huán)境樣品的測定中具有重要的應用價值。近年，時間分辨熒光生物顯微成像技術(shù)的快速發(fā)展又為稀土熒光生物探針的發(fā)展與應用提供了新的機遇。在本博士學位論文的研究中，利用稀土熒光配合物作為發(fā)光基團，制備了數(shù)種新型的納米稀土熒光生物探針，并考察了其在時間分辨熒光生化分析中的應用性能。
　　將β-二酮-銪(Ⅲ)熒光配合物

2、2，6-BHHD-Eu3+-BPT與硅烷化試劑IPTES共價偶聯(lián)，利用反相微乳液聚合法制備了一種新型的可見光激發(fā)納米硅膠-銪熒光微粒。這種納米微粒呈現(xiàn)規(guī)則的球形，具有均一的尺寸（42±3nm）和較長的熒光壽命(346μs)，其激發(fā)波長能夠從紫外光區(qū)延伸到475 nm。將其用于鏈霉親和素標記后，成功實現(xiàn)了復雜水樣品中鼠隱孢子蟲和小隱孢子蟲卵囊的時間分辨熒光免疫成像測定。
　　合成了一種可見光激發(fā)的銪(Ⅲ)熒光配合物BHHBB-Eu3

3、+-BPT，并利用去核鐵蛋白的解離-重組結(jié)構(gòu)特性制備了一種去核鐵蛋白包裹銪(Ⅲ)配合物的熒光蛋白Eu@AFt。該蛋白激發(fā)峰波長達420 nm，且具有長的熒光壽命（365μs）和優(yōu)良的生物親和性，可直接用于活體細胞的時間分辨熒光成像。將該蛋白用線粒體靶向定位基團SPTPP修飾后制備了一種具有線粒體靶向定位作用的熒光蛋白Eu@AFt-SPTPP，并實現(xiàn)了HeLa細胞中線粒體的共聚焦熒光顯微鏡靶向定位成像。
　　利用去核鐵蛋白的結(jié)構(gòu)特性

4、，通過在該蛋白內(nèi)包裹鋱(Ⅲ)熒光配合物PTTA-Tb3+，并在其表面修飾對NO具有特異性響應的羅丹明衍生物分子，制備了一種基于鋱(Ⅲ)配合物-羅丹明熒光共振能量轉(zhuǎn)移機理的對NO具有特異性響應的比率型納米熒光探針Tb@AFt-Rh。該探針具有熒光壽命長、Stokes位移大、選擇性和靈敏度高、生物相容性好及可用于比率型熒光檢測等優(yōu)點，被成功用于HepG2細胞及大型蚤內(nèi)NO的時間分辨熒光成像測定。
　　將銪(Ⅲ)熒光配合物PTTA-Eu