青霉菌侵染哈密瓜前后超氧化物歧化酶(SOD)的克隆及表達.pdf

1、哈密瓜是新疆的一種特色果蔬,在采摘后儲藏過程中容易腐爛變質,所以對其儲藏保鮮方面的研究一直是研究的熱點。超氧化物歧化酶(SOD)是一種可以清除自由基的廣泛存在的酶。目前研究發(fā)現(xiàn)與植物的保藏性,抗病性等密切相關。通過對哈密瓜SOD進行研究為哈密瓜的貯藏保鮮提供新的思路和方向,具有重大的意義。
　　本研究主要是對新疆哈密瓜晚熟品種伽師瓜進行研究,通過對其SOD酶的部分片段進行克隆以及生物信息學分析,對哈密瓜致病青霉菌侵染前后的SOD酶

2、活性變化以及SOD酶的表達量變化做比較研究,得出SOD表達量與活性之間的關系,為后續(xù)SOD活性調控位點,以及SOD的抗病機制的研究做鋪墊。
　　(1)哈密瓜Cu/Zn-SOD基因部分序列的克隆及分析
　　采用PCR技術,克隆出Cu/Zn-SOD基因cDNA部分序列,命名為HmCu/ZnSOD,提交 Genebank,獲得登錄號為KF671956。
　　HmCu/ZnSOD cDNA序列長403bp,編碼133個氨基酸,

3、氨基酸序列分子量為13649.0kDa,等電點PI值是5.24;進化樹分析顯示哈密瓜的Cu/Zn-SOD與同屬葫蘆科的黃瓜和西瓜屬同一進化分支;氨基酸序列同源性比較得出與其他植物的Cu/Zn-SOD基因高度同源,該基因的亞細胞定位點是細胞質,沒有跨膜區(qū)域,為細胞內親水性非分泌蛋白。
　　(2)采用實時熒光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)方法對接菌不同時間哈密瓜Cu/Zn-SOD基因轉錄水平進行研究
　　

4、在同一哈密瓜接菌部分,其在24小時和72小時的表達量會提高,其中在24小時達到最高;不接菌部分,其表達量在24小時增長,在48小時、72小時又下降在96小時又增長,其變化趨勢滯后于接菌;在正常未接菌的哈密瓜上,SOD隨著時間的延長基因表達變化幅度在各個時間點都普遍低于哈密瓜接菌,且總體趨勢緩慢增長。
　　(3)對接菌哈密瓜與不接菌哈密瓜在儲藏過程中的SOD酶變化進行測定
　　采用NBT光還原法對哈密瓜SOD接菌與不接菌時不同