斑馬魚hepcidin-2抑菌活性的研究.pdf

1、Hepcidin是一種富含半胱氨酸的多肽,其結(jié)構(gòu)與防御素很相似,因為其空間結(jié)構(gòu)中都存在四個二硫鍵。Hepcidin又被稱為LEAP(liver-expressed antimicrobial peptide),既肝臟中表達(dá)的抗菌肽。Hepcidin首次發(fā)現(xiàn)是分別由兩個實驗室在2000年和2001年在人類的體液中找尋抗菌肽時發(fā)現(xiàn)的。隨后又有研究發(fā)現(xiàn)hepcidin是一直以來人們在尋找的一種參與遺傳性血色沉著病和慢性貧血的鐵調(diào)節(jié)激素,hep

2、cidin還參與感染和炎癥的急性應(yīng)激反應(yīng)。因此,hepcidin既是一種維持體內(nèi)鐵平衡的鐵調(diào)節(jié)激素又是一種抗菌肽。
　　目前,已經(jīng)報道斑馬魚存在兩個hepcidin基因(基因登錄號是:AY363452和AY363453)。當(dāng)斑馬魚注射細(xì)菌出現(xiàn)炎癥反應(yīng)后在腹部器官、皮膚和心臟的hepcidin基因表達(dá)量都上升。然而,hepcidin的抗菌活性及其抗菌活性與二硫鍵的關(guān)系還未有研究。
　　本文中我們克隆得到了斑馬魚Hepcidin

3、-2基因。斑馬魚Hepcidin-2的ORF有276bp,編碼92個氨基酸的前體蛋白,其中包括20個氨基酸的成熟肽。我們通過原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了重組 hepcidin-2成熟肽—rHCD。通過液體抑菌實驗我們證實了斑馬魚hepcidin-2融合蛋白rHCD能抑制革蘭氏陰性菌大腸桿菌和鰻弧菌及革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的生長,其對4種細(xì)菌的最小抑菌濃度分別是18、15、13和9μM。通過透射電鏡,觀察到融合蛋白rHCD能直接破