古井貢酒大曲中微生物群落結(jié)構(gòu)的鑒定及分析.pdf

1、在傳統(tǒng)釀酒過(guò)程中,大曲在很大程度上決定了釀造質(zhì)量,不同的大曲含有不同的微生物群落結(jié)構(gòu)及生物多樣性。本研究基于16SrDNA序列分析法鑒定了古井貢酒大曲微生物群落組成。同時(shí),通過(guò)古井貢酒大曲微生物群落物種快速定量識(shí)別技術(shù)的初步研究,為進(jìn)一步研究可實(shí)用化的快速定量技術(shù)提供必要的參考。
　　本研究主要可以分為以下四個(gè)部分:
　　首先,通過(guò)對(duì)PCR擴(kuò)增條件的摸索以及16SrDNA通用引物的篩選,初步確定PCR擴(kuò)增條件、體系以及擴(kuò)增目

2、的片段長(zhǎng)度。其次,通過(guò)TA克隆及藍(lán)白斑篩選,將陽(yáng)性克隆菌株送往測(cè)序公司測(cè)序。再次,根據(jù)16SrDNA測(cè)序結(jié)果初步鑒定古井貢酒大曲微生物種屬類別,進(jìn)一步通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析其微生物群落構(gòu)成、生物多樣性及進(jìn)化程度。第四,依據(jù)上述序列研制古井貢酒大曲微生物物種快速定量識(shí)別技術(shù)。
　　本研究所得實(shí)驗(yàn)結(jié)論如下:
　　(1)首次對(duì)古井大曲微生物群落進(jìn)行了分子鑒定,初步得到古井大曲微生物種屬信息。主要分布于厚壁菌門(Firmicutes

3、)以及變形菌門(Proteobacteria)中,其中主要優(yōu)勢(shì)菌屬有六類,分別為枝芽孢桿菌屬(Virgibacillus)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、乳桿菌科(Lactobacillaceae)、泛菌屬(Pantoea)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)以及高溫放線菌科(Thermoactinomycetaceae)。
　　(2)與高溫大曲微生物群落結(jié)構(gòu)相比,中溫大曲微生物種屬較多。
　　(3)通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)

4、育樹(shù),發(fā)現(xiàn)一株潛在的枝芽孢桿菌新種菌株GJ-1-20。
　　(4)通過(guò)對(duì)快速識(shí)別古井大曲微生物群落物種幾種策略的初步研究,發(fā)現(xiàn)僅依據(jù)這些微生物的1500bp左右的極為相似的16SrDNA。暫時(shí)很難同時(shí)對(duì)20種左右的物種進(jìn)行定量化區(qū)分,即使TaqMan-MGB探針技術(shù)也難以勝任。由于未來(lái)十年內(nèi)微生物群落中絕大部分微生物都沒(méi)有全基因組序列的情況不會(huì)改變,所以僅依靠這些16SrDNA序列研制低成本的精確到單堿基定量識(shí)別的技術(shù)非常值得期待