外源性GM-CSF對(duì)膿毒癥DCs的生物效應(yīng).pdf

1、[研究目的]
　　 膿毒癥(sepsis)是臨床危重病癥中極為常見(jiàn)的一種并發(fā)癥,病情兇險(xiǎn)、病死率高。近年來(lái),隨著抗感染治療和器官功能支持技術(shù)的長(zhǎng)足進(jìn)步,使得膿毒癥的預(yù)后有一定的改善,但病死率仍高達(dá)30％～70％。膿毒癥的發(fā)病機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜,近年來(lái)研究證實(shí),免疫功能紊亂在膿毒癥發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中確實(shí)具有重要作用。膿毒癥時(shí)免疫功能紊亂并不是以往所單一認(rèn)為的“過(guò)度炎癥反應(yīng)”,更多的是由于“過(guò)度免疫抑制”所引起的。機(jī)體在早期經(jīng)歷了短暫的SI

2、RS反應(yīng)后是長(zhǎng)期的代償性抗炎反應(yīng)綜合征(CARS)和混合性抗炎反應(yīng)綜合征(MARS),導(dǎo)致炎癥反應(yīng)失控和內(nèi)環(huán)境失衡,同時(shí)伴隨有機(jī)體一系列免疫功能的改變——免疫效應(yīng)細(xì)胞凋亡增加、膜分子表達(dá)變化、細(xì)胞因子分泌改變等。樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)是聯(lián)系固有免疫及適應(yīng)性免疫的橋梁,位于免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的上游,是調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞分化的關(guān)鍵。許多研究均證實(shí),膿毒癥可導(dǎo)致DCs凋亡增加,數(shù)量減少,且與死亡率密切相關(guān)。粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)是DCs天

3、然的活化刺激物,在膿毒癥時(shí)血清濃度下降,且亦與預(yù)后相關(guān)。本研究擬觀察外源性GM-CSF對(duì)膿毒癥小鼠模型脾臟DCs數(shù)量、凋亡率及分泌IL-12能力的影響,同時(shí)觀察生存率的變化,以探討GM-CSF對(duì)膿毒癥DCs的生物效應(yīng)及臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 [研究方法]
　　 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
　　 GM-CSF對(duì)膿毒癥小鼠脾臟DCs數(shù)量、凋亡率及血清IL-12的影響:選擇體重25g(6～8周)雄性昆明鼠120只,隨機(jī)分配入組。正

4、常對(duì)照組:40只,不予特殊處理,正常喂養(yǎng)；CLP組:32只,盲腸結(jié)扎穿孔；常規(guī)治療組:24只,CLP術(shù)后12、24、36、48、60、72、84h腹腔注射頭孢曲松(上海羅氏)5mg/kg；GM-CSF治療組:24只,CLP術(shù)后除常規(guī)治療外另于12、36、60、84h皮下注射GM-CSF(美國(guó)PeproTech公司)20ug/kg。
　　 GM-CSF對(duì)膿毒癥小鼠生存預(yù)后的影響:雄性昆明鼠40只隨機(jī)分配入正常對(duì)照組、CLP組、常規(guī)

5、治療組、GM-CSF治療組,每組10只。累計(jì)96h時(shí)死亡及存活個(gè)數(shù)。
　　 2、實(shí)驗(yàn)方法
　　 各組于CLP術(shù)后0、12、24、48、72h分批處死小鼠(n=8),流式細(xì)胞儀測(cè)定各組脾臟DCs數(shù)量及凋亡率,ELISA法檢測(cè)各組血清IL-12濃度。
　　 3、統(tǒng)計(jì)方法
　　 測(cè)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,應(yīng)用One-Way ANOVA方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；并應(yīng)用Logist回歸方法分析不同處理因素對(duì)

6、于生存率的影響。以P>0.05為差異不顯著、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 [結(jié)果]
　　 1、脾臟DCs數(shù)量及凋亡率:CLP組在整個(gè)觀察窗的所有時(shí)間點(diǎn)脾臟DCs凋亡增加,數(shù)量明顯減少(P<0.05)；常規(guī)治療(頭孢曲松)可以加劇DCs的丟失(P<0.05)；GM-CSF可以增加膿毒癥時(shí)脾臟DCs的數(shù)量(P<0.05),但由于本實(shí)驗(yàn)未設(shè)置GM-CSF單獨(dú)治療組,其效應(yīng)部分與頭孢菌素疊加,48、72

7、h時(shí)和CLP組無(wú)差異(P>0.05),但通過(guò)Logist回歸分析,可以看出GM-CSF是獨(dú)立保護(hù)性因子(OR=0.079)。在增加DCs數(shù)量的同時(shí),GM-CSF也增加其凋亡(P<0.05),推測(cè)是繼于DCs活化的后效應(yīng),即所謂激活誘導(dǎo)細(xì)胞死亡(AICD)。
　　 2、血清IL-12濃度:CLP組IL-12血清濃度表現(xiàn)為于12h高峰的單向曲線趨勢(shì)(P<0.05)；常規(guī)治療(頭孢曲松)對(duì)這一趨勢(shì)無(wú)干預(yù)效應(yīng)(P>0.05)；GM-CS

8、F干預(yù)后IL-12濃度顯著下降(P<0.05),推測(cè)GM-CSF能夠促進(jìn)DCs分化成熟,增加其抗原呈遞能力,同時(shí)減少I(mǎi)L-12的釋放。
　　 3、不同處理因素對(duì)于生存率的影響:Logist回歸分析入選CLP及GM-CSF兩因素,而剔除了常規(guī)治療措施——頭孢曲松,同時(shí)分析得GM-CSF是保護(hù)性因子(OR=0.079)。
　　 [結(jié)論]
　　 膿毒癥時(shí)脾臟DCs凋亡增加、數(shù)量減少,IL-12釋放增多,且GM-CSF血