外源性GM-CSF在硬脊膜損傷修復中的實驗研究.pdf

1、目的：通過組織形態(tài)學觀察、肉眼大體觀察及免疫組織化學等方法評價外源性粒-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)在實驗性硬脊膜損傷修復過程中所發(fā)揮的作用。
　　方法：硬脊膜損傷實驗動物模型的制備采用新西蘭大白兔27只，分別行L3椎體全椎板減壓，制造破損面積約為0.2×0.2mm的硬脊膜損傷動物模型，將動物模型隨機分為三組，每組9只實驗動物：A組：采用自體筋膜進行修復，局部注射生理鹽水0.2ml；B組：采用生理鹽水浸泡后的人工硬脊膜修復

2、，局部注射生理鹽水0.2ml；C組：采用GM-CSF浸泡后人造硬脊膜修復，局部注射GM-CSF0.2ml；各組實驗動物分別于術后1W、2W、4W各處死3只實驗動物，完整取下包括周圍組織及修復材料在內的脊髓節(jié)段長約2cm，分別行大體肉眼觀察記錄不同時間段各組硬脊膜修復過程中存在的差異和周圍瘢痕組織的生長情況進行評價；組織形態(tài)學觀察采用蘇木素-伊紅染色（HE染色)觀察不同炎性細胞及成纖維細胞的表達進而評價不同處理因素對硬脊膜損傷修復過程的影

3、響；免疫組化采用灰度分析對硬脊膜損傷修復部位白介素（IL）-1和IL-6在胞漿內的陽性表達大面積進行對比，權衡各處理因素在硬脊膜損傷修復過程中作用。
　　結果：大體肉眼觀察結果：1W處死的實驗動物中，各組硬脊膜修復程度相當，C組周圍肉芽及瘢痕組織生長較其他兩組旺盛，可觀察到B、C兩組人造脊柱膜與周圍組織粘連較輕易于分離，而A組自體筋膜與周圍組織粘連較嚴重不易分離；2W處死的各組實驗動物中A、B兩組周圍肉芽組織及瘢痕生長情況相當，C

4、組肉芽組織及瘢痕生長生長情況較前兩組明顯增加，硬脊膜缺損處修復效果顯著，A組自體筋膜與硬脊膜及周圍組織粘連明顯，界限消失，B、C兩組粘連較輕，易于分離；4W處死的各組實驗動物中，各組硬脊膜缺損均以修復，各組修復部位周圍肉芽組織生長情況均較前明顯曾多，差異不明顯，但A組粘連明顯，B、C兩組人造硬脊膜與周圍組織粘連輕易于分離。HE染色觀察結果：對三組實驗動物標本染色涂片，觀察硬脊膜修復部位粒細胞、巨噬細胞及成纖維細胞的表達發(fā)現，C組與其他兩

5、組比較存在統(tǒng)計學差異（P＜0.05），可觀察到C組細胞表達明顯多于其他兩組，A、B兩組比較未見明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)；免疫組化結果顯示：三組實驗標本中處理因素對IL-1、IL-6的表達發(fā)揮主效應，其中以C組最為明顯，處理因素與作用時間二者之間無交互作用。
　　結論：外源性粒-巨噬細胞集落刺激因子在硬脊膜損傷修復過程中能起到趨化、增殖破損硬脊膜周圍炎性細胞及細胞因子的表達，從而縮短硬脊膜損傷的修復時間，同時，GM-CSF促進