山羊支原體lppA和GM-CSF基因的克隆及序列分析.pdf

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文山羊支原體lppA和GMCSF基因的克隆及序列分析姓名：張任娜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：王豪舉20080601兩南大學(xué)碩十學(xué)位論文隆。用生物信息學(xué)軟件對(duì)帥A基因序列進(jìn)行分析并進(jìn)行了蛋白分子的二級(jí)結(jié)構(gòu)、親水性區(qū)域及抗原指數(shù)等的測(cè)定。結(jié)果表明：擴(kuò)增出了1256bp左右的lppA基因片段，與預(yù)期的結(jié)果一致?？寺〉膌ppA基因核苷酸序列包含一個(gè)開放閱讀框(ORF)，編碼著脂蛋白質(zhì)LppA的前體一523個(gè)氮基

2、酸殘基?？寺∩窖蛑гwlppA基因核苷酸序列測(cè)定及氨基酸序列比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在lppA的第67、136和676處的堿基分別發(fā)生變化，lppA氨基酸在第20位和第223位存在差異，另一處為同義突變。脂蛋白LppA存在約15個(gè)Ⅱ螺旋區(qū)，19個(gè)p折疊區(qū)和較多的拐點(diǎn)區(qū)。除了N端525位氨基酸存在稍大的疏水區(qū)域，LppA的絕大部份為親水區(qū)。與其相似的是該蛋白的抗原性，除了N端525位氨基酸外，LppA絕大部份區(qū)域的抗原性均較強(qiáng)。lppA基因稀有密碼

3、子的分析結(jié)果表明：lppA基因中含有兩個(gè)密碼子UGA，編碼唧，但在大腸桿菌中UGA為終止密碼子。這將導(dǎo)致該基因無(wú)法在大腸桿菌中順利表達(dá)。因此，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)考慮用突變的方法將該基因中TGA突變?yōu)門GG，以便能在大腸桿菌中表達(dá)。綜上所述，本研究成功克隆了山羊的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)的基因和絲狀支原體山羊亞種PG3株表面抗原LppA的基因。用生物信息學(xué)軟件對(duì)兩種基因序列進(jìn)行分析，并進(jìn)行了蛋白分子的二級(jí)結(jié)構(gòu)、親水性區(qū)域及抗