硒摻雜羥基磷灰石材料的制備及其抗癌效應的實驗研究.pdf

1、羥基磷灰石(HA)因其良好的生物相容性并被廣泛應用于生物醫(yī)學領域，是近年來的研究熱點之一。本文設計、合成并表征了硒元素摻雜的羥基磷灰石納米粒子(SeHAN)，期望利用Se的抗癌作用，用于骨缺損修復的同時能夠抑制骨癌的復發(fā)。本論文的研究內容主要包括以下三個方面：
　?。?）以亞硒酸鈉為原料，應用共沉淀法制備出不同Se/P摩爾比的SeHAN。通過XRD、FTIR、TEM等檢測發(fā)現(xiàn)，Se/P摩爾比不超過1.0時，產(chǎn)物為Se摻雜的HA相，

2、隨著Se濃度提高，晶格發(fā)生變化，結晶度降低。Se/P摩爾比為0.3時，產(chǎn)物中出現(xiàn)了無定形絮狀物質。Se/P摩爾比大于10.0時，產(chǎn)物中出現(xiàn)了水合亞硒酸鈣物相。熱穩(wěn)定性煅燒實驗發(fā)現(xiàn)，Se/P摩爾比為0.1的粉體在900℃熱處理2小時條件下具有較好的熱穩(wěn)定性。這些結果表明，制備HA相的SeHAN，最高Se/P摩爾比為0.1。
　?。?）通過細胞培養(yǎng)實驗研究發(fā)現(xiàn)，SeHAN可促進骨髓間充質干細胞(BMSCs)增殖，同時誘導骨肉瘤細胞(M

3、G63)的凋亡。SeHAN被MG63細胞吞噬，定位于胞漿或細胞核邊緣，SeHAN能使MG63細胞的增殖活力下降近40％；隨著SeHAN使用濃度的上升，MG63細胞增殖活力降低；在同一濃度下，MG63增殖活力隨Se摻雜量的增高而降低。細胞染色結果表明，MG63細胞早期凋亡，與細胞內活性氧物質的產(chǎn)量增高，線粒體膜電位降低有關，因此推測SeHAN可能通過活化線粒體凋亡信號通路而誘導了MG63細胞凋亡。
　?。?）體內動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，S

4、eHAN具有抗骨肉瘤和抗肝癌效應。通過原位骨肉瘤裸鼠模型實驗發(fā)現(xiàn)，原位注射SeHAN懸液能延緩瘤細胞的生長速度，抑制其轉移。與純HAN相比，SeHAN具有更好的組織降解性能。血象及血液生化檢測顯示，SeHAN可改善肝、腎及心功能。組織病理及免疫組化研究也發(fā)現(xiàn)，注射的SeHAN使腫瘤組織中央大部壞死，并使MMP-9蛋白的表達降低。以荷高轉移潛能肝癌裸鼠作為模型，注射SeHAN懸液，能夠顯著延長荷瘤裸鼠的壽命，對照組、HAN組和SeHAN組

5、裸鼠在36天的總存活率分別為50.00％、76.92％和100.00％。血液生化檢測證實，SeHAN對裸鼠的肝腎功能具有明顯低的毒性。組織病理學檢測也發(fā)現(xiàn)，經(jīng)SeHAN處理后腫瘤內部存在大片組織壞死和鈣沉積。免疫組化和免疫印跡結果也發(fā)現(xiàn)，與腫瘤惡性發(fā)生發(fā)展密切相關的三種蛋白Ki-67、VEGF和MMP-9在注射SeHAN后表達量顯著降低。
　　綜上所述，SeHAN不僅有望發(fā)展成為一種新型的納米材料用于骨肉瘤的治療，還可作為一種抗腫