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1、羥基磷灰石(HA)因其良好的生物相容性并被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)之一。本文設(shè)計(jì)、合成并表征了硒元素?fù)诫s的羥基磷灰石納米粒子(SeHAN),期望利用Se的抗癌作用,用于骨缺損修復(fù)的同時(shí)能夠抑制骨癌的復(fù)發(fā)。本論文的研究?jī)?nèi)容主要包括以下三個(gè)方面:
?。?)以亞硒酸鈉為原料,應(yīng)用共沉淀法制備出不同Se/P摩爾比的SeHAN。通過(guò)XRD、FTIR、TEM等檢測(cè)發(fā)現(xiàn),Se/P摩爾比不超過(guò)1.0時(shí),產(chǎn)物為Se摻雜的HA相,
2、隨著Se濃度提高,晶格發(fā)生變化,結(jié)晶度降低。Se/P摩爾比為0.3時(shí),產(chǎn)物中出現(xiàn)了無(wú)定形絮狀物質(zhì)。Se/P摩爾比大于10.0時(shí),產(chǎn)物中出現(xiàn)了水合亞硒酸鈣物相。熱穩(wěn)定性煅燒實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),Se/P摩爾比為0.1的粉體在900℃熱處理2小時(shí)條件下具有較好的熱穩(wěn)定性。這些結(jié)果表明,制備HA相的SeHAN,最高Se/P摩爾比為0.1。
?。?)通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),SeHAN可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)增殖,同時(shí)誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞(M
3、G63)的凋亡。SeHAN被MG63細(xì)胞吞噬,定位于胞漿或細(xì)胞核邊緣,SeHAN能使MG63細(xì)胞的增殖活力下降近40%;隨著SeHAN使用濃度的上升,MG63細(xì)胞增殖活力降低;在同一濃度下,MG63增殖活力隨Se摻雜量的增高而降低。細(xì)胞染色結(jié)果表明,MG63細(xì)胞早期凋亡,與細(xì)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)的產(chǎn)量增高,線粒體膜電位降低有關(guān),因此推測(cè)SeHAN可能通過(guò)活化線粒體凋亡信號(hào)通路而誘導(dǎo)了MG63細(xì)胞凋亡。
?。?)體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),S
4、eHAN具有抗骨肉瘤和抗肝癌效應(yīng)。通過(guò)原位骨肉瘤裸鼠模型實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),原位注射SeHAN懸液能延緩瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)速度,抑制其轉(zhuǎn)移。與純HAN相比,SeHAN具有更好的組織降解性能。血象及血液生化檢測(cè)顯示,SeHAN可改善肝、腎及心功能。組織病理及免疫組化研究也發(fā)現(xiàn),注射的SeHAN使腫瘤組織中央大部壞死,并使MMP-9蛋白的表達(dá)降低。以荷高轉(zhuǎn)移潛能肝癌裸鼠作為模型,注射SeHAN懸液,能夠顯著延長(zhǎng)荷瘤裸鼠的壽命,對(duì)照組、HAN組和SeHAN組
5、裸鼠在36天的總存活率分別為50.00%、76.92%和100.00%。血液生化檢測(cè)證實(shí),SeHAN對(duì)裸鼠的肝腎功能具有明顯低的毒性。組織病理學(xué)檢測(cè)也發(fā)現(xiàn),經(jīng)SeHAN處理后腫瘤內(nèi)部存在大片組織壞死和鈣沉積。免疫組化和免疫印跡結(jié)果也發(fā)現(xiàn),與腫瘤惡性發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的三種蛋白Ki-67、VEGF和MMP-9在注射SeHAN后表達(dá)量顯著降低。
綜上所述,SeHAN不僅有望發(fā)展成為一種新型的納米材料用于骨肉瘤的治療,還可作為一種抗腫
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