建立基于超薄切片的三維重構技術解析組織精細空間結構.pdf

1、對生物組織內部精細結構的分析是了解生物體生理功能的基礎，主要方法是對組織樣品進行三維重構。重構技術涉及的主要步驟有對組織樣品的處理，切片，染色、成像、二維拼接和三維重構。目前使用的組織切片主要有石蠟切片，冰凍切片，半薄及超薄切片，臨床上病理分析主要采用石蠟和冰凍切片，切片較厚，分辨率較低；半薄超薄切片主要用于電鏡下組織細胞亞顯微結構的觀察，切片較薄，分辨率遠高于石蠟和冰凍切片。對獲得的圖片進行二維拼接和三維重構可以獲得組織內部精細空間結

2、構，但是目前的方法均存在Z軸分辨率較低的缺陷。
　　傳統(tǒng)顯微鏡在 X、Y軸上的分辨率為250nm，Z軸的分辨率是700nm，實際成像分辨率超過1μm。本文建立基于超薄切片方法的高分辨三維成像技術，可顯著提高Z軸分辨率，用于組織精細結構的研究。對組織樣品處理后，可將組織切成50nm-1000nm的連續(xù)半薄或超薄切片，具體切片的厚度即Z軸的分辨率。另外對切片進行染色，或者多重抗體標記，利用全自動顯微鏡對連續(xù)切片進行成像，對獲得的圖像進