廣西產(chǎn)藥用植物絞股藍(lán)遺傳多樣性分析及分子水平鑒定方法的建立.pdf_第1頁(yè)
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1、絞股藍(lán)(Gynostemma Pentaphyllum(Thunb)Makino)為葫蘆科(Cucurbitaceae)絞股藍(lán)屬(Gynostemma BL.)多年生草本植物,是廣西特產(chǎn)藥用植物之一。目前已經(jīng)從絞股藍(lán)中分離并鑒定了100多種皂苷類(lèi)物質(zhì),其中有八種皂苷與原人參二醇型人參皂苷結(jié)構(gòu)完全相同,是目前除五加科植物以外,少數(shù)證實(shí)含有人參皂苷的植物,具有重要的藥用價(jià)值和商業(yè)價(jià)值。但由于絞股藍(lán)遺傳背景復(fù)雜,又易于與烏蘞莓(Cyratia

2、 japonica)混淆,其開(kāi)發(fā)利用受到限制。
   本研究主要目的是篩選合適的RAPD隨機(jī)引物對(duì)廣西不同產(chǎn)地絞股藍(lán)進(jìn)行遺傳多樣性分析并構(gòu)建DNA指紋圖譜,為篩選品質(zhì)優(yōu)良的品種及種質(zhì)資源保護(hù)提供理論依據(jù);另一方面利用分子標(biāo)記技術(shù)鑒別絞股藍(lán)及其混淆品烏蘞莓,建立藥用植物絞股藍(lán)分子水平鑒定的方法體系。
   本研究采用改進(jìn)的CTAB法成功提取了絞股藍(lán)和烏蘞莓新鮮樣品、干燥樣品DNA。利用生物信息學(xué)方法挑選出20條RAPD隨機(jī)

3、引物,其中19條均能有效擴(kuò)增絞股藍(lán)基因組DNA,且獲得的RAPD指紋圖譜清晰、重復(fù)性好。19條引物共擴(kuò)增出354條帶,分子量在約200~5000bp之間,其中294(83.3%)條為多態(tài)性帶。利用NTSYS-pc軟件計(jì)算遺傳相似系數(shù)(genetic similarity,GS),按UPGMA法進(jìn)行聚類(lèi)分析。8份廣西產(chǎn)絞股藍(lán)種質(zhì)材料間的GS值變化范圍為0.5367~0.7825,平均GS值為0.6353。根據(jù)聚類(lèi)樹(shù)狀圖,明顯分為兩大類(lèi)群,

4、獲得的聚類(lèi)結(jié)果與絞股藍(lán)地理起源和生長(zhǎng)環(huán)境一致。
   通過(guò)對(duì)絞股藍(lán)指紋圖譜分析,獲得兩個(gè)絞股藍(lán)RAPD標(biāo)記(Length1≈500bp,Length2≈750bp),分別命名為J-500和J-750,可用作在分子水平上鑒別絞股藍(lán)。將J-750克隆測(cè)序分析,8個(gè)克隆序列相似性均在97%以上,并發(fā)現(xiàn)是一段未報(bào)道過(guò)的新DNA序列。利用Oligo6軟件針對(duì)該序列設(shè)計(jì)特異引物,將RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記;利用SCAR標(biāo)記結(jié)合18S

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