球毛殼ND35產(chǎn)次生代謝物的優(yōu)化培養(yǎng)、理化性質(zhì)及生物安全性.pdf

1、內(nèi)生真菌是存在于植物體內(nèi)和宿主之間具有共生關(guān)系的真菌，已在許多植物中發(fā)現(xiàn)。內(nèi)生真菌存在于植物體內(nèi)，能夠產(chǎn)生次生代謝類物質(zhì)、誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性、促進(jìn)植物生長(zhǎng)、與病原菌競(jìng)爭(zhēng)生態(tài)位點(diǎn)等多種拮抗機(jī)制抑制植物病害的發(fā)生，成為生物防治中重要的生防因子。
　　 為了在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用無(wú)公害技術(shù)防治植物病害，本研究以楊樹內(nèi)生真菌球毛殼（Chaetomium globosum）ND35為供試菌株，采用L16（45）正交試驗(yàn)法對(duì)液體培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化；

2、利用，pH紙色譜和捷克八溶劑系統(tǒng)紙色譜方法及紫外-可見光譜掃描法對(duì)次生代謝物進(jìn)行了理化性質(zhì)的初步分析；用薄層層析和高效液相色譜及平板抑菌法檢測(cè)分析了粗提液中的活性成分和對(duì)楊樹腐爛病菌的抑菌效果；還對(duì)球毛殼ND35產(chǎn)生次生代謝物液體培養(yǎng)的主要?jiǎng)恿W(xué)指標(biāo)進(jìn)行了分析。結(jié)果表明：優(yōu)化后培養(yǎng)基配方為：1％葡萄糖，1％蔗糖，0.5％牛肉膏，0.02％硫酸亞鐵，0.01％維生素B1，pH值為7。球毛殼ND35的抑菌作用分為活菌體的抑菌作用和代謝活性物

3、質(zhì)的抑菌作用，液體培養(yǎng)后在胞內(nèi)和胞外均產(chǎn)生了抗生物質(zhì)，有較好的熱穩(wěn)定性。該物質(zhì)pH值為中性，極性較弱，易溶于有機(jī)溶劑，難溶于水。紫外-可見光譜掃描可以確定：在221 nm處有最大的吸收峰，221 nm處的吸收值可以作為活性物質(zhì)含量的指標(biāo)。次生代謝物的薄層層析和高效液相色譜分析發(fā)現(xiàn)有4個(gè)組分對(duì)楊樹腐爛病菌有抑菌活性。球毛殼ND35液體培養(yǎng)生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)表明，發(fā)酵過程中各指標(biāo)是連續(xù)變化的。
　　 通過高效液相色譜檢測(cè)，球毛殼ND35的粗

4、提液中含有吲哚乙酸、赤霉素和麥角甾醇。經(jīng)過多個(gè)生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定發(fā)現(xiàn)，球毛殼ND35粗提液對(duì)菜豆有促生作用。濃度為1000μg/ml的球毛殼ND35粗提物對(duì)菜豆灰霉病的防治效果達(dá)到82.38％，濃度為1000μg/ml的ND35粗提液對(duì)菜豆立枯病的防治效果達(dá)到33.4％。球毛殼ND35粗提液誘導(dǎo)了菜豆體內(nèi)防御酶活性和酚類物質(zhì)的增加，ND35粗提液與菜豆灰霉病菌處理組的苯丙氨酸解氨酶（PAL）在第2 d達(dá)到最大比活，比活是1.1267 U·μg

5、-1h-1；過氧化物酶（POD）在第8 d達(dá)到最大比活，其比活是9.4956 U·μg-1 min-1。多酚氧化酶（PPO）在第8 d達(dá)到最大比活，其比活是4.8506 U·μg-1 min-1?？偡雍康? d達(dá)到最大值，最大值是308.93 OD280 g-1FW-1。
　　 球毛殼（C.globosum）ND35次生代謝物粗提物對(duì)植物生長(zhǎng)性狀的影響和子囊孢子在水中的存活、對(duì)植物根際土壤微生物的影響，以及對(duì)小白鼠和大白兔的毒