球毛殼ND35產次生代謝物的優(yōu)化培養(yǎng)、理化性質及生物安全性.pdf

1、內生真菌是存在于植物體內和宿主之間具有共生關系的真菌，已在許多植物中發(fā)現。內生真菌存在于植物體內，能夠產生次生代謝類物質、誘導植物產生系統(tǒng)抗性、促進植物生長、與病原菌競爭生態(tài)位點等多種拮抗機制抑制植物病害的發(fā)生，成為生物防治中重要的生防因子。
　　 為了在農業(yè)生產中應用無公害技術防治植物病害，本研究以楊樹內生真菌球毛殼（Chaetomium globosum）ND35為供試菌株，采用L16（45）正交試驗法對液體培養(yǎng)基進行優(yōu)化；

2、利用，pH紙色譜和捷克八溶劑系統(tǒng)紙色譜方法及紫外-可見光譜掃描法對次生代謝物進行了理化性質的初步分析；用薄層層析和高效液相色譜及平板抑菌法檢測分析了粗提液中的活性成分和對楊樹腐爛病菌的抑菌效果；還對球毛殼ND35產生次生代謝物液體培養(yǎng)的主要動力學指標進行了分析。結果表明：優(yōu)化后培養(yǎng)基配方為：1％葡萄糖，1％蔗糖，0.5％牛肉膏，0.02％硫酸亞鐵，0.01％維生素B1，pH值為7。球毛殼ND35的抑菌作用分為活菌體的抑菌作用和代謝活性物

3、質的抑菌作用，液體培養(yǎng)后在胞內和胞外均產生了抗生物質，有較好的熱穩(wěn)定性。該物質pH值為中性，極性較弱，易溶于有機溶劑，難溶于水。紫外-可見光譜掃描可以確定：在221 nm處有最大的吸收峰，221 nm處的吸收值可以作為活性物質含量的指標。次生代謝物的薄層層析和高效液相色譜分析發(fā)現有4個組分對楊樹腐爛病菌有抑菌活性。球毛殼ND35液體培養(yǎng)生長動力學表明，發(fā)酵過程中各指標是連續(xù)變化的。
　　 通過高效液相色譜檢測，球毛殼ND35的粗

4、提液中含有吲哚乙酸、赤霉素和麥角甾醇。經過多個生長指標測定發(fā)現，球毛殼ND35粗提液對菜豆有促生作用。濃度為1000μg/ml的球毛殼ND35粗提物對菜豆灰霉病的防治效果達到82.38％，濃度為1000μg/ml的ND35粗提液對菜豆立枯病的防治效果達到33.4％。球毛殼ND35粗提液誘導了菜豆體內防御酶活性和酚類物質的增加，ND35粗提液與菜豆灰霉病菌處理組的苯丙氨酸解氨酶（PAL）在第2 d達到最大比活，比活是1.1267 U·μg

5、-1h-1；過氧化物酶（POD）在第8 d達到最大比活，其比活是9.4956 U·μg-1 min-1。多酚氧化酶（PPO）在第8 d達到最大比活，其比活是4.8506 U·μg-1 min-1?？偡雍康? d達到最大值，最大值是308.93 OD280 g-1FW-1。
　　 球毛殼（C.globosum）ND35次生代謝物粗提物對植物生長性狀的影響和子囊孢子在水中的存活、對植物根際土壤微生物的影響，以及對小白鼠和大白兔的毒