杜仲細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及主要次生代謝物積累的研究.pdf

1、以杜仲無菌苗為材料，進行了愈傷組織的誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)研究，建立了搖瓶懸浮培養(yǎng)體系，測定了培養(yǎng)過程中次生代謝產(chǎn)物總黃酮和綠原酸的含量。 培養(yǎng)基的種類、外植體來源以及植物激素的配比對杜仲愈傷組織的誘導(dǎo)率及愈傷組織生長狀況均有很大影響。經(jīng)過篩選確定杜仲無菌苗子葉為適合的誘導(dǎo)材料，在此基礎(chǔ)上進一步優(yōu)化了愈傷組織培養(yǎng)條件，得到了愈傷組織生長的適應(yīng)培養(yǎng)基B5+0.5mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+3％蔗糖，初始pH5.8

2、。同時進行了愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織培養(yǎng)18d生物量達(dá)到最大，增長了3.67倍，黃酮與綠原酸最高含量分別為12.25mg/g和1.564mg/g。 杜仲細(xì)胞懸浮培養(yǎng)過程中，在固體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上重新優(yōu)化了基本培養(yǎng)基及激素配比，并研究了接種量、碳源種類、蔗糖濃度、pH值對懸浮細(xì)胞生長的影響，得到了懸浮培養(yǎng)的適宜生長條件：B5+0.5mg/L NAA+0.6mg/L6-BA+3％蔗糖，初始pH5.52，初始接種量為1.6g·DCW/L

3、。同時，測定了在篩選出的培養(yǎng)條件下杜仲懸浮細(xì)胞活力變化、生長動力學(xué)、底物消耗動力學(xué)、黃酮與綠原酸的生產(chǎn)動力學(xué)。發(fā)現(xiàn)在該條件下生長的杜仲細(xì)胞最大生物量積累可達(dá)6.8g·DCW/L，最大比生長速率μ<,max>=0.665d<'-1>。杜仲懸浮細(xì)胞生長曲線近似于“S”型，對數(shù)生長期為2～8d。細(xì)胞生長動力學(xué)方程為： 懸浮培養(yǎng)條件下次生代謝產(chǎn)物黃酮與綠原酸最高含量分別達(dá)到16.63mg/g和3.93mg/g，產(chǎn)量分別達(dá)到113.08m