量子點(diǎn)生物傳感膜快速同步定量檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的研究.pdf

1、惡性腫瘤是目前乃至未來(lái)病死率較高的病種之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織發(fā)布的《2014世界癌癥報(bào)告》顯示，2012年全球有820萬(wàn)人死于癌癥。對(duì)腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)有利于實(shí)現(xiàn)癌癥的早期診斷，從而提高治療效率，降低死亡率。腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)方法多種多樣，以免疫層析法最為受到關(guān)注。免疫層析技術(shù)因其簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、低樣品量、無(wú)需專業(yè)人員操作、可實(shí)現(xiàn)床旁快速檢測(cè)等特點(diǎn)而迅速發(fā)展。但以膠體金為代表的免疫層析試紙條靈敏度不高，進(jìn)行多組分分析時(shí)需要多個(gè)檢測(cè)帶，且以定性檢測(cè)

2、為主，無(wú)法滿足對(duì)多種腫瘤標(biāo)志物的早期同步定量檢測(cè)需求。
　　免疫層析法所采用的標(biāo)記材料對(duì)免疫傳感器的性能起決定性的作用。熒光量子點(diǎn)（QDs）具有熒光強(qiáng)度高、光化學(xué)穩(wěn)定性好、吸收光譜連續(xù)、發(fā)射光譜窄而對(duì)等特性，可實(shí)現(xiàn)“一元激發(fā)，多元發(fā)射”?；赒Ds的優(yōu)勢(shì)，針對(duì)目前免疫層析產(chǎn)品的不足，我們提出以多色QDs作熒光標(biāo)記物，開發(fā)一種基于多色QDs標(biāo)記的生物傳感膜，以實(shí)現(xiàn)對(duì)多種腫瘤標(biāo)志物的快速、同步、定量檢測(cè)。
　　本文以1-(3-二

3、甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和 N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）為偶聯(lián)劑，制備546nm CdSe/ZnS QDs-抗甲胎蛋白單抗（QDs546-anti-AFP McAb）和620nm CdSe/ZnS QDs-抗癌胚抗原單抗(QDs620-anti-CEA McAb)偶聯(lián)物。將兩種偶聯(lián)物按一定比例混合噴涂于結(jié)合墊上，鼠源甲胎蛋白單抗（anti-AFP McAb）和鼠源癌胚抗原單抗（anti-CEA McAb）混合物以及

4、羊抗鼠IgG分別包被于硝酸纖維素膜(NC膜)上作為檢測(cè)帶（T帶）和質(zhì)控帶（C帶），在此基礎(chǔ)上制作多色QDs生物傳感膜。通過熒光閱讀儀檢測(cè)傳感膜上T帶和C帶的熒光強(qiáng)度，計(jì)算出T帶和C帶的比值（T/C），對(duì)應(yīng)相應(yīng)的樣品濃度繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可達(dá)到定量檢測(cè)的目的。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，本課題組所開發(fā)的多色QDs生物傳感膜對(duì)AFP和CEA的檢測(cè)限分別為2 ng∕ml和1 ng∕ml，且無(wú)明顯交叉反應(yīng)，靈敏度、特異性高，樣品恢復(fù)率好，批內(nèi)穩(wěn)定性好，批