全氟化合物的量子點(diǎn)熒光生物檢測方法研究.pdf

1、目的：本研究根據(jù)全氟化合物中的全副辛烷磺酸基化合物（PFOS）、全氟辛酸（PFOA）與過氧化物酶增值激活受體（PPARα）特異性結(jié)合的特性和新型熒光標(biāo)記物量子點(diǎn)（QDs）建立一種全新的針對環(huán)境水體中PFCs的快速、高通量的分子生物學(xué)熒光檢測方法。
　　 方法：制備PFOS-BSA 復(fù)合體并將其包被在酶標(biāo)板上，加入各濃度組標(biāo)準(zhǔn)品PFOS與固定的PFOS 競爭激活PPARα，之后將PPARα-PFOS 復(fù)合體轉(zhuǎn)移至包被PPARα特異

2、性抗體的酶標(biāo)板中進(jìn)行固定。將Biotin 標(biāo)記的DNA探針加入到酶標(biāo)板中，再用QDs 作為熒光標(biāo)記物，通過親和素-生物素系統(tǒng)標(biāo)記在PPRE的DNA雙鏈上，構(gòu)成特異性量子點(diǎn)熒光探針，最后通過檢測結(jié)合在PFOS 激活的PPARα受體上的熒光探針的信號強(qiáng)度來定量檢測PFOS，之后根據(jù)熒光強(qiáng)度和對應(yīng)實(shí)驗(yàn)組的PFOS 濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用該方法同樣對PFOA 進(jìn)行檢測。按照國家標(biāo)準(zhǔn)采集環(huán)境水樣并進(jìn)行預(yù)處理，分別用上述方法和高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（

3、HPLC/MS）方法進(jìn)行檢測，根據(jù)檢測結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出環(huán)境水樣中PFCs的濃度。
　　 結(jié)果：利用QDs 熒光生物檢測方法通過測量不同濃度的PFOS、PFOA 標(biāo)準(zhǔn)品，檢測QDs 信號的變化并繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線（PFOS：y=19.112x-23.995，R2=0.9642; PFOA：y=17.601x-20.914，R2=0.973），結(jié)果顯示該方法在濃度為2.5ng/L—75ng/L 范圍內(nèi)線性最優(yōu)并具有良好的重復(fù)性，最

4、低檢測限為2.5ng/L，加標(biāo)回收率分別為107.8％和110.3％根據(jù)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果的峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（PFOS：y=2E-05x-26.479，R2=0.996; PFOA：y=2E-05x-25.023，R2=0.997），結(jié)果顯示該方法濃度2.5ng/L—75ng/L 范圍內(nèi)具有良好的重復(fù)性，最低檢測限為1 ng/L，加標(biāo)回收率分別為104.3％和105.9％。分別用兩種方法對長江（武漢段）、漢江（武漢段）、東湖、武