血細胞分析儀質控品的研制及其初步評價.pdf

1、目的：1.采用正交實驗設計方法研究制備血細胞分析儀自制質控品。2.探索人源血液作為血細胞分析儀自制質控品原料時紅細胞、白細胞和血小板的固定條件以及紅細胞的保養(yǎng)液配方。3.對血細胞分析儀自制質控品的均勻性與穩(wěn)定性進行初步評價。
　　方法：1.從全血中分離出紅細胞、白細胞和血小板。各類血細胞固定條件的探索采用L9(34)正交表，三因素為甲醛、戊二醛和固定時間，每個因素各自有三個處理水平。按照設計的固定條件固定結束，去除固定液，加入緩沖

2、液。將配置好的細胞懸液置于4℃，隔天測定紅細胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞比容(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、紅細胞體積分布寬度(RDW-SD)、白細胞(WBC)、血小板(PLT)、平均血小板體積(MPV)等指標，連續(xù)測定14天，計算各個組連續(xù)測定的平均值、標準差和CV值，采用所計算出的CV值做正交設計的方差分析，實驗平行進行三次。2.采用最佳固定方案固定好紅細胞后，將固定的紅細胞按實驗設計加入對應的保養(yǎng)液。保養(yǎng)液的最佳

3、配方摸索采用L12(211)正交表，其中包含八個因素分別為葡萄糖、腺嘌呤、檸檬酸三鈉、甘露醇、巴比妥鈉、檸檬酸合并檸檬酸三鈉、磷酸二氫鈉、甘油，每個因素各自有兩個水平。將配制好的紅細胞懸液置于4℃，連續(xù)測定14天，計算各個組連續(xù)測定的平均值、標準差和CV值，采用所計算出的CV值做正交設計的方差分析，實驗平行進行三次。3.根據CNAS-GL03《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》和ISO指南35《標準物質定值——般原則和統(tǒng)計原理》，用單

4、因素方差分析的方法評價自制質控物的均勻性，用一元線性回歸分析的方法評價自制質控品的穩(wěn)定性。
　　結果：1.不同的固定條件處理組之間，RBC、HGB、PLT三項指標檢測結果的變化沒有差異（P＞0.05）。HCT的最佳固定條件為4％甲醛，不同戊二醛濃度、不同固定時間的各組之間沒有差異(P＞0.05)。MCV、RDW-SD兩項指標的最佳固定條件為4％甲醛加0.5％戊二醛（P＜0.05），不同固定時間的各組之間沒有差異(P＞0.05)。W

5、BC最佳固定條件為2.2％甲醛加0.5％戊二醛，固定時間為30min(P＜0.05)。MPV最佳固定條件為4％甲醛，不同戊二醛濃度、不同固定時間的各組之間沒有差異(P＞0.05）。2.在RBC、HGB、HCT這三項指標的檢測結果變化中，不同的保養(yǎng)液配方組之間沒有差異(P＞0.05)。在MCV這項指標中保養(yǎng)液中對固定紅細胞起保護作用的有效成分為葡萄糖、檸檬酸合并檸檬酸三鈉（P＜0.05），巴比妥鈉起破壞作用(P＜0.05)。在RDW-SD

6、這項指標中保養(yǎng)液中對固定紅細胞起保護作用的有效成分為葡萄糖、檸檬酸三鈉、檸檬酸合并檸檬酸三鈉(P＜0.05)，巴比妥鈉起破壞作用(P＜0.05)。3.質控物均勻性結果顯示:在RBC、HGB、HCT、RDW-SD、WBC、PLT這六項指標中，樣品內和樣品間統(tǒng)計學分析差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;在MCV、MPV這兩項指標中存在統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。各項指標的均勻性不確定度分別為RBC(0.125％)、HGB(0.446％)、HC

7、T(0.163％)、MCV(1.028％)、RDW-SD(1.122％)、WBC(0.018％)、PLT(0.391％)、MPV(0.068％)，各指標均勻性不確定度均小于方法重復性測量的不確定度。4.質控品開瓶穩(wěn)定性數據分析結果顯示，開瓶14天內RBC、HGB、WBC三項指標的檢測結果偏差分布范圍為-0.008～0.004、-0.013～0.006、-0.023～0.041，一元線性回歸分析顯示測定結果與時間不存在線性趨勢（P＞0.0

8、5），這三項指標在開瓶14天內保持穩(wěn)定。HCT、PLT兩項指標檢測結果偏差分布范圍為0～0.055、-0.012～0.104，一元線性回歸分析顯示測定結果與時間存在線性趨勢（P＜0.05)，尚不能認為該兩指標穩(wěn)定。長期穩(wěn)定性結果顯示，RBC、HGB、WBC三項指標測定結果與時間不存在線性趨勢（P＞0.05），能至少保持穩(wěn)定59天。
　　結論：1.不同血細胞的最佳固定條件不同，應該分開固定。2.甲醛與戊二醛固定可以維持紅白細胞與血小