血細(xì)胞分析儀

1、血液細(xì)胞分析儀基礎(chǔ)知識講座,,,,1,.,.,血液細(xì)胞分析儀原理與關(guān)鍵技術(shù)講座大綱,血液檢驗(yàn)的地位。血液的常識。血細(xì)胞分析儀的知識。血液細(xì)胞分析儀示例。血液細(xì)胞分析儀的展望,本次講座重點(diǎn)內(nèi)容,1. 血液細(xì)胞分析儀的基本原理2. 白細(xì)胞的分類3. 如何保證產(chǎn)品的質(zhì)量4. PE6000液路分析,血球儀的發(fā)展史,42年美國科學(xué)家?guī)鞝柼匕l(fā)明了用電阻法計數(shù)粒子的專利技術(shù)。56年他又將這一技術(shù)應(yīng)用于血液細(xì)胞計數(shù)獲得成功。62年我國

2、第一臺血細(xì)胞計數(shù)儀在上海研制成功。60年代未血球儀除完成血球計數(shù)外增加了血紅蛋白測試（HGB），70年代血小板計數(shù)問世。80年代開發(fā)了血細(xì)胞3分類、5分類。90年代開發(fā)出可對網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的分析儀，同時5分類及幼稚細(xì)胞檢測 更成熟，并發(fā)展成為血細(xì)胞分析流水線。,,醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)包括：臨床生物化學(xué)、臨床微生物學(xué)、臨床免疫學(xué)、臨床血液學(xué)和臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)（臨床檢驗(yàn)）。臨床檢驗(yàn)學(xué)——著重對人體血液、尿液、糞便及其它體液和分泌物進(jìn)行檢查。血液檢驗(yàn)是

3、臨床檢驗(yàn)中最常用、最有效的基本內(nèi)容。,血液檢驗(yàn)的作用,對各種系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別。是診斷各種血液病的主要依據(jù)。,一. 血液的基本知識,,血液的組成,血液的概況,血液是由血細(xì)胞和血漿組成，血細(xì)胞包括紅細(xì)胞、血小板和白細(xì)胞。血漿中包括各種蛋白（抗體、酶類等）、無機(jī)鹽、激素、維生素和代謝產(chǎn)物。水分占91%~92%。理化特征：紅色（血紅蛋白）不透明，含量占體重的7-9%，約5L。Ph值為7.35~7.45，比重為1.05~1.06，相對粘度

4、為4~5，滲透壓為2.6~3.9kPa。,,血液的功能,通過循環(huán)系統(tǒng)與全身各個組織器官密切聯(lián)系。參與機(jī)體呼吸：攜氧和排出二氧化碳。運(yùn)輸：將營養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)送到器官組織，將體內(nèi)代謝廢物運(yùn)往腎、肺等器官排出體外。防御：血液中白細(xì)胞和抗體參與機(jī)體抗感染和其他免疫反應(yīng)。調(diào)節(jié)：調(diào)節(jié)體液滲透壓、酸堿平衡和體溫平衡。,,將正常血液抗凝離心后得到沉淀的血液。,,,,液體的血漿占50-60%血細(xì)胞占40-60%（白細(xì)胞、血小板、紅細(xì)胞）。,,,,,,

5、,血液的基本組成,血漿白細(xì)胞和血小板紅細(xì)胞,血細(xì)胞的分類和形態(tài),壽命：7天 120天 8天直徑：60~120fl 120~1000fl 2~30fl (20um) (6.7~7.7um)

6、 (2~3um) 功能：抗感染，免疫 　　 攜氧，代謝產(chǎn)物　　　　凝血功能,白細(xì)胞 紅細(xì)胞 血小板,,白細(xì)胞的種類,中性粒細(xì)胞（75%） 單核細(xì)胞（5%） 淋巴細(xì)胞（25%） 嗜酸性粒細(xì)胞 嗜堿性粒細(xì)胞 經(jīng)過瑞氏染色后的各種白細(xì)胞,血細(xì)

7、胞的發(fā)育過程,共同的母細(xì)胞：造血多能干細(xì)胞單核細(xì)胞,原單核細(xì)胞,,幼單核細(xì)胞,單核細(xì)胞,,,,,,白細(xì)胞的發(fā)育,原始粒細(xì)胞,早幼粒細(xì)胞,嗜酸性中幼粒細(xì)胞,嗜酸性晚幼粒細(xì)胞,嗜酸性桿狀核,嗜酸性分葉核,嗜堿性中幼粒細(xì)胞,嗜堿性晚幼粒細(xì)胞,,,,嗜堿性桿狀核,,嗜堿性分葉核,中性中幼粒細(xì)胞,,中性晚幼粒細(xì)胞,中性桿狀核,中性份葉核,,,,紅細(xì)胞的發(fā)育,原紅細(xì)胞 早幼紅細(xì)胞 中幼紅細(xì)胞 晚幼紅細(xì)胞

8、 成熟紅細(xì)胞,,,,,血細(xì)胞分析儀的知識,,手工法檢驗(yàn)的過程,1、細(xì)胞計數(shù)（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等血細(xì)胞的鏡下計數(shù)）2、定量血紅蛋白3、白細(xì)胞分類（瑞氏染色）4、其它：血細(xì)胞比積、紅細(xì)胞形態(tài)、嗜酸球計數(shù)等,,,血球儀發(fā)展,50年代~80年代（半自動）：需將樣本經(jīng)機(jī)外稀釋后才能檢測，易受干擾，隨機(jī)誤差也大。80年代后（全自動）：血液直接被吸入血液細(xì)胞分析儀后，在機(jī)內(nèi)自動稀釋、自動加溶血素、定時檢測，有較高的精確度和準(zhǔn)確性

9、。,血球儀發(fā)展,近年（聯(lián)合型血液細(xì)胞分析系統(tǒng)）：將血細(xì)胞分析、涂片機(jī)、染片機(jī)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)儀串聯(lián)在一起。自動加樣系統(tǒng)和真空采血管的應(yīng)用，避免實(shí)驗(yàn)室的隨機(jī)誤差，提高工作效率，避免實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)造成的血行感染，成為儀器發(fā)展和使用的潮流。,血細(xì)胞分析儀的發(fā)展,50年代，庫爾特發(fā)明電阻抗法庫爾特原理（電阻抗法）：根據(jù)血細(xì)胞是不良導(dǎo)體的性質(zhì)，它通過微孔時就引起電阻的變化，電信號的變化被檢測出來。,,血細(xì)胞分析儀的現(xiàn)況,國內(nèi)：二級醫(yī)院以上，全自動三

10、分類二級醫(yī)院以下，二分類或三分類或沒有國外：全自動五分類，應(yīng)用其它新技術(shù)，可檢測幼稚血細(xì)胞。,,手工法 血細(xì)胞分析儀,手工法操作過程的隨機(jī)誤差，實(shí)驗(yàn)器材的系統(tǒng)誤差及檢測方法本身的固有誤差，計數(shù)不但費(fèi)時費(fèi)力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性、準(zhǔn)確性差。,血細(xì)胞分析儀測量水平不斷提高，測量參數(shù)不斷增加，快速、高效。為臨床提供更多有用的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。,,,工作原理,細(xì)胞分析原理：阻抗法血紅蛋白測量:光電比色法氰化高鐵血紅蛋白(HiCN

11、)測定法。其它參數(shù)：通過計算機(jī)內(nèi)換算,,白細(xì)胞分析原理,白細(xì)胞分析原理,加溶血素后，白細(xì)胞大小分布如下： 第一群：小細(xì)胞區(qū)（35~90fl） 淋巴細(xì)胞 第二群：中間細(xì)胞（90~160fl） 嗜堿性、嗜酸性、單核 第三群：大細(xì)胞區(qū)（160fl以上） 中性粒細(xì)胞,,血細(xì)胞分析原理血小板分析原理,阻抗法,,電阻阻抗法計數(shù)原理,血細(xì)胞分析儀是

12、利用小孔換能裝置實(shí)現(xiàn)的,是一個用阻抗法計數(shù)的核心部件---阻抗法測試傳感器（見下頁示意圖），管內(nèi)充滿導(dǎo)電液體，兩電極接上恒流電源，中部為一小孔，小孔孔徑與細(xì)胞成比列，在負(fù)壓的作用下，細(xì)胞通過小孔瞬間，排開等體積的電解液，使電解液的等效電阻瞬間變大，這個變大的電阻在恒流源作用下引起一個等比例增大的電壓。細(xì)胞離開小孔電解液的等效電阻又恢復(fù)正常，直到下一個細(xì)胞到達(dá)小孔，這樣細(xì)胞連續(xù)的通過小孔，就在電極兩端產(chǎn)生一連串的電壓脈沖。脈沖的個數(shù)與通過

13、小孔的細(xì)胞數(shù)相當(dāng)，脈沖的幅度與細(xì)胞的體積成正比。將這些脈沖經(jīng)過整形、放大，計算、儲存、處理，就得到了細(xì)胞分類、計數(shù)的原始數(shù)據(jù)。,液路的計數(shù)實(shí)驗(yàn),二. 血球儀的三分類,2,白細(xì)胞的三分類,第一類（35~90fL）：淋巴細(xì)胞第二類（90~160fL）：嗜堿性、嗜酸性、單核第三類（>160fL）：中性粒細(xì)胞,白細(xì)胞直方圖,血液細(xì)胞分析儀將白細(xì)胞按體積大?。妷悍档母叩停?5~450fL分為256個通道，每個通道1.64fL，細(xì)胞

14、按大小放在不同的通道中，得到白細(xì)胞的直方圖。第一群（35~90fL）：淋巴細(xì)胞第二群（90~160fL）：單核細(xì)胞（中間細(xì)胞）第三群（>160fL）：中性粒細(xì)胞（大細(xì)胞）,WBC直方圖,*各種報警符號,,RBC直方圖,,PLT直方圖,,氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法,紅細(xì)胞溶解后，血紅蛋白被氧化成高鐵血紅蛋白（Hi），再與CN根結(jié)合生成穩(wěn)定棕紅色氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）。HiCN在540nm有最大吸收峰。HiCN

15、法具有操作簡單，顯色快且穩(wěn)定，直接定值等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)：氰化物有劇毒(氰化鉀）無氰溶血素：我公司已于03年研制成功，現(xiàn)已投入批量生產(chǎn)。,,血細(xì)胞分析的過程,標(biāo)本的采集和運(yùn)輸。稀釋標(biāo)本或用全血上機(jī)分析。檢驗(yàn)者對結(jié)果的判斷和分析。編輯或修改病人報告。打印報告。,,,重做,,,注意事項(xiàng),保證采樣的規(guī)范性。試劑對實(shí)驗(yàn)的影響。（應(yīng)盡量采用原裝試劑和溶血素）操作的影響,標(biāo)準(zhǔn)物混勻,樣品的混勻,三. 血球儀的質(zhì)量保證,,質(zhì)控物（Qual

16、ity Control）,血球產(chǎn)品“質(zhì)控物”是用來標(biāo)定出廠儀器的“標(biāo)準(zhǔn)”，也是醫(yī)院用來定期效準(zhǔn)儀器的“標(biāo)準(zhǔn)”。目前使用的“質(zhì)控物”大多是進(jìn)口產(chǎn)品，在“質(zhì)控物”包裝盒中供應(yīng)商會提供一個參考“靶值”。由于不同種類的儀器有其差易，供應(yīng)商會提供的“靶值”僅供參考。生產(chǎn)商必須測定出與自己生產(chǎn)的儀器相符合的“靶值”供生產(chǎn)作標(biāo)定用。,質(zhì)控物（Quality Control）,用途：用于對血液細(xì)胞分析儀的質(zhì)量控制，以保證儀器測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。用法：

17、與真正血樣的操作方式相同，用血液細(xì)胞分析儀對質(zhì)控物進(jìn)行檢驗(yàn)，通過分析測量質(zhì)控物所得到的數(shù)值來評估儀器的準(zhǔn)確性。試劑成分：穩(wěn)定的人類紅血球，生物模擬血小板成分和固化紅細(xì)胞（用于模擬白血球），以及含防腐劑的介質(zhì)。,溯源,“溯源”就是找一臺溯源標(biāo)準(zhǔn)機(jī)（稱靶機(jī)），目前只有被檢驗(yàn)行業(yè)公認(rèn)的“庫爾特”和“東亞”兩家公司銷售出的血球儀（它一定是被定期效準(zhǔn)過）。,參數(shù)轉(zhuǎn)移（一）,首先準(zhǔn)備一臺被檢產(chǎn)品的“標(biāo)準(zhǔn)機(jī)”取30~50只新鮮血，到選中“靶機(jī)”上

18、測試，將測試報告連同血樣在2小時內(nèi)送到被檢產(chǎn)品的“標(biāo)準(zhǔn)機(jī)”進(jìn)行測試將測試數(shù)據(jù)分成3~5組（每10只為一組）統(tǒng)計各組在“溯源”的標(biāo)準(zhǔn)機(jī)上測試的各組各參數(shù)的均值，計算出總均值，例A,參數(shù)轉(zhuǎn)移（二）,統(tǒng)計各組在被檢產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)機(jī)上測試的各組各參數(shù)的均值，計算出總均值，例B計算血樣轉(zhuǎn)移參數(shù)K1（K1=A/B）將質(zhì)控物到被檢產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)機(jī)上測試3~5組，統(tǒng)計均值，例C計算質(zhì)控轉(zhuǎn)移參數(shù)K2（K2=B/C）,計算靶值,根據(jù)質(zhì)控靶值、K1和K2計

19、算出該批質(zhì)控的靶值，提供給生產(chǎn)定標(biāo)。 每批質(zhì)控到后都必須這樣確定靶值。 定靶值過程是一個精細(xì)的工作，一般由專人負(fù)責(zé)。 定靶值過程接觸新鮮血，要特別提醒，注意事項(xiàng)！,定標(biāo),1、準(zhǔn)備：定標(biāo)液 （質(zhì)控液） 本底測試——通過 確認(rèn)重復(fù)性好（最少3次）2、標(biāo)定過程：設(shè)好進(jìn)血模式手工法： 新系數(shù)=目前系數(shù)×標(biāo)定液參考值/ 測量平均值自動定標(biāo)：儀器自動換算新的系數(shù)。,,

20、儀器的定標(biāo)和質(zhì)量控制,校準(zhǔn)物溯源：定標(biāo)：維持儀器的準(zhǔn)確性質(zhì)控：檢測可能存在的系統(tǒng)誤差，保證重復(fù)性。（對操作者的理論及操作水平有較高要求）,血細(xì)胞分析儀測試參數(shù),WBC白細(xì)胞數(shù)目：4.0-10.0 X109/LRBC 紅細(xì)胞數(shù)目：3.5-5.50 X1012/LPLT 血小板數(shù)目：100-300 X109/LHGB 血紅蛋白：110-160 g/LLymph# 淋巴細(xì)胞數(shù)目：0.6-4.1 X109/LMid# 中間細(xì)胞數(shù)

21、目：0.1-1.8 X109/LGran# 粒細(xì)胞數(shù)目：2.0-7.8 X109/LLymph% 淋巴細(xì)胞百分比：20.0-40.0%Mid% 中間細(xì)胞百分比：1.0-15.0%,,Gran% 粒細(xì)胞百分比：50.0-70.0%MCHC 平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度：320-360 g/LMCV 平均紅細(xì)胞體積：80.0-99.0fLMCH 平均紅細(xì)胞血紅蛋白：26.0-32.0pgRDW-CV 紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)：11.5

22、-14.5%RDW-SD 紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差：35.0-56.0fLHCT 紅細(xì)胞壓積：36.0-48.0 %MPV 平均血小板體積：7.4-10.4 fLPDW 血小板分布寬度：15.0-17.0%PCT 血小板壓積：0.108-0.282 %,臨床應(yīng)用價值,一、診斷臨床疾病WBCHGB和RBCPLT二、常規(guī)檢查判斷身體的健康情況和免疫能力,,,臨床應(yīng)用,血細(xì)胞參數(shù)的臨床意義,紅細(xì)胞計數(shù)：1. 生理變異：隨年齡

23、和性別不同有差異。 新生嬰兒、位處高原、情緒激動可使紅細(xì)胞增加。2. 病理意義：先天性心臟病、慢性肺疾患、慢性一氧化碳中毒、高原病等慢性缺氧可刺激紅細(xì)胞生成引起紅細(xì)胞增加。嚴(yán)重嘔吐、腹瀉等引起脫水時，血液濃縮，紅細(xì)胞相對增多。反之，慢急性失血缺乏造血原料，骨髓造血障礙等引起的貧血時，紅細(xì)胞數(shù)減少。 白細(xì)胞計數(shù)：1. 生理變異：隨年齡不同時間不同，季節(jié)不同，變異較大。早上低、下午高，飯前較飯后低，冬季較夏季高，激烈運(yùn)動及體力勞

24、動都可使白細(xì)胞數(shù)增多。2.病理意義：急性化膿性感染，如膿腫、扁桃體炎、肺炎、闌尾炎 、腦膜炎、敗血癥等白細(xì)胞數(shù)增多。外燒傷，手術(shù)后，尿毒癥等也會增高。 障礙性貧血，部分急性白血病等造血干細(xì)胞疾病，某些傳染性疾病如傷寒、黑熱病、流感、傳染性肝炎等白細(xì)胞數(shù)減少。,,,,血小板計數(shù)：1. 生理變異：健康人血小板數(shù)較穩(wěn)定，無性別、年齡差別。2. 病理意義：血小板減少見于脾功能亢進(jìn)、尿毒癥、腫瘤骨髓轉(zhuǎn)移等。白血病、敗血癥、障礙性貧血、溶血

25、性貧血、骨髓增生綜合癥均可伴有血小板減少。 血小板增多見于原發(fā)性血小板增多癥，慢性粒細(xì)胞白血病，增多癥，脾切除手術(shù)后等。骨折、出血也可引起血小板中性粒細(xì)胞增多，急性化膿性感染，粒細(xì)胞白血病，急性出血，溶血，尿、酸、汞、鉛中毒。減少，傷寒，流感嚴(yán)重感染等。嗜酸細(xì)胞增多，慢性粒細(xì)胞白血病、癌轉(zhuǎn)移、鉛、鉍中毒。減少，傷寒、副傷寒等。淋巴細(xì)胞增多，百日咳、傳染性單核細(xì)胞增多癥、慢性淋巴細(xì)胞白血病、麻疹、腮腺炎、結(jié)核、傳染性肝炎等。減少

26、，傳染病急性期、放射病、細(xì)胞免疫缺陷等。,,,血液細(xì)胞分析儀的特點(diǎn),電子原理、光學(xué)原理、化學(xué)原理的綜合光、機(jī)、電、生物、化學(xué)、流體力學(xué)、液、氣的集成計算技術(shù)應(yīng)用的典范,血液細(xì)胞分析儀發(fā)展現(xiàn)狀,1. 產(chǎn)品品種多樣化： 2. 控制智能化： 3. 測試自動化： 4. 檢測項(xiàng)目增多： 5. 系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)化： 6. 先進(jìn)測試技術(shù)在血液細(xì)胞分析儀中的應(yīng)用：,血液細(xì)胞分析儀中的先

27、進(jìn)技術(shù),鞘流技術(shù)：灼燒技術(shù)：掃流技術(shù)：射頻技術(shù)：防返流技術(shù)：微孔顯影技術(shù)：多次計數(shù)：激光測試技術(shù)：自動進(jìn)樣：旋轉(zhuǎn)閥：流式細(xì)胞術(shù)：,特殊技術(shù)在血液分析儀的應(yīng)用,計數(shù)周期的控制：時間控制；容量測定方法。標(biāo)本處理技術(shù)：預(yù)稀釋、靜脈血雙進(jìn)樣；自動進(jìn)樣及清洗；旋轉(zhuǎn)閥；自動涂片及染片；全自動血液處理及分析系統(tǒng)。細(xì)胞計數(shù)準(zhǔn)確性控制：重疊校正；脈沖編輯技術(shù)；三次計數(shù)表決；掃流技術(shù)；防返流技術(shù)；鞘流技術(shù)等。,液路的計數(shù)實(shí)驗(yàn),掃流,

28、新的方法,①容量、電導(dǎo)、光散射（VCS）測導(dǎo)法②阻抗與射頻技術(shù)聯(lián)合檢測分類法③光散射與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用④其它：多角度偏振光散射白細(xì)胞分類技術(shù)（MAPSS）,分血閥,激光法,近十余年來，隨著半導(dǎo)體激光器技術(shù)的進(jìn)步，使用（相關(guān)試劑處理加激光加流式細(xì)胞術(shù)）方法的白細(xì)胞五分類血球儀成為當(dāng)前的主流。激光法五分類血球儀使用光散射進(jìn)行測量都是基于Mie散射理論 ，如東亞SF3000通過激光激發(fā)產(chǎn)生熒光進(jìn)行血細(xì)胞分析成為高檔機(jī)型的基本技術(shù)

29、，如東亞XT1800系列，XE2100,激光法檢測原理,670nm半導(dǎo)體激光器,五分類血球儀系統(tǒng)構(gòu)成,試劑流體光學(xué)電路數(shù)據(jù)分析,多角度激光偏振光散射檢測法,,90°消偏振光散射將嗜酸性細(xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來,,,,,,,,,,,,,,,,0°前角散射光用來測定細(xì)胞的體積,10°狹角散射光用來測定細(xì)胞結(jié)構(gòu),,,,,,90°垂直散射光對細(xì)胞內(nèi)部顆粒及細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行測量,,,,

30、,,鞘流技術(shù),液體流動狀態(tài)有一個分界點(diǎn)，這是一個常量等于2300，既稱為雷偌數(shù)Re。 Re=dρv/η d – 管內(nèi)經(jīng)，ρ- 密度，v – 流速，η- 粘滯系數(shù) 當(dāng) Re2300 時液流處于湍流狀態(tài)。 假設(shè)：流體為純水ρ=1，η=1， d=100μm 代入公式計算得： v=23米/秒 此值即是純水的湍流、層流分界點(diǎn)。,鞘流技術(shù),鞘流技術(shù),液路的湍流實(shí)驗(yàn),液路的層流實(shí)驗(yàn),液路的激光實(shí)

31、驗(yàn),射頻檢測原理,細(xì)胞壁不能使低頻電流通過能通過高頻電流 細(xì)胞核的大小和密度不同，它們對高頻電流的阻抗也不同，因此可以用來區(qū)分白細(xì)胞,射頻與電阻抗聯(lián)合檢測原理,射頻與電阻抗聯(lián)合檢測原理,電阻抗和射頻電導(dǎo),這種方法是分別采用四個檢測系統(tǒng)來檢測不同類型的細(xì)胞①淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入溶血劑使紅細(xì)胞溶解，而使白細(xì)胞保持完整，細(xì)胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài)，當(dāng)這些細(xì)胞通過檢測系統(tǒng)時，對白細(xì)胞進(jìn)行電阻

32、抗法（測量細(xì)胞體積）和射頻電導(dǎo)法（檢測細(xì)胞核和顆粒密度）的聯(lián)合檢測，結(jié)果將細(xì)胞分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)和中性粒細(xì)胞三個群體。②嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞兩種檢測系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入特殊的溶血劑，除嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞外，其他細(xì)胞均被溶解或萎縮，再對保持完整的嗜酸性細(xì)胞或嗜堿性細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。③幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入硫化氨基酸，由于占位不同，結(jié)合在幼稚細(xì)胞的氨基酸比成熟細(xì)胞多，且對溶血劑有抵抗作用，當(dāng)加入溶血劑時，成熟細(xì)胞被

33、溶解，只保留著可能存在的幼稚細(xì)胞用來計數(shù)。SYSMEX公司的SE9000血細(xì)胞分析儀,自動進(jìn)樣,五分類血球儀技術(shù)現(xiàn)狀,全球只有為數(shù)不多的幾家公司擁有五分類技術(shù)，國內(nèi)還沒有。基本方法都是阻抗、射頻、散射和熒光的方法，各個公司在使用它們的時候所用的組合與側(cè)重點(diǎn)不同。每種方法都與其獨(dú)特的試劑系統(tǒng)緊密相關(guān)。主流技術(shù)是激光散射結(jié)合熒光的方法,技術(shù)現(xiàn)狀—雙角度散射,Sysmex公司在其產(chǎn)品SF3000上運(yùn)用。低角度散射(1~5°

34、)反映細(xì)胞尺寸信息(Mie理論);高角度散射(6~20)反映細(xì)胞的內(nèi)部形態(tài),血細(xì)胞分析儀的基本工作原理,血細(xì)胞分析儀的類型電學(xué)型 電阻型：利用血細(xì)胞通過微孔時瞬間的電阻變化產(chǎn)生脈沖電流而計數(shù)。 電容型：利用電極間加高頻，血細(xì)胞通過時，靜電容量發(fā)生變化而計數(shù)光學(xué)型 血細(xì)胞固定型：利用光散射計數(shù)。 血細(xì)胞流動型：利用流體力學(xué)原理計數(shù),血液細(xì)胞分析儀的評價,精確度攜帶污染重復(fù)性線性

35、可比性,血液細(xì)胞分析儀的評價,精確度（準(zhǔn)確性） 取低、中、高值標(biāo)本各十份，每份重復(fù)測定3次。存放2小時，重復(fù)上述測試。將所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，可得到不同含量的精確度，變異系數(shù)CV值應(yīng)滿足儀器給定的范圍。,血液細(xì)胞分析儀的評價,攜帶污染率 當(dāng)分析儀分析狀態(tài)穩(wěn)定后，測試三次高值質(zhì)控物（i1、i2、i3），立即測試三次稀釋液（j1、j2、j3）,血液細(xì)胞分析儀的評價,重復(fù)性 用中值質(zhì)控物，重復(fù)測量10次 Mean----平

36、均值 ；SD----標(biāo)準(zhǔn)差 ；CV----變異系數(shù) ；n----測量次數(shù)；Xi----指定參數(shù)第i 次測量值,血液細(xì)胞分析儀的評價,線性 用稀釋液將高值血樣稀釋為100％、80％、60％、40％、20％、10% 六種濃度的樣本。每種濃度樣本測量2次，取平均值作為測量結(jié)果，用最小二乘法分別計算出理論值，理論值與實(shí)際測量值的偏差應(yīng)滿足儀器給定的范圍。,血液細(xì)胞分析儀的評價,可比性 在新儀器指標(biāo)的測定尚無參考方法時，

37、要對儀器進(jìn)行評價，只能將儀器測試的結(jié)果與常規(guī)方法測試的結(jié)果相比較，如一致既為與常規(guī)方法有可比性。,血球分析儀的組成,電路部分：液路部分：機(jī)械部分：軟件部分：,電路部分,CPU板：數(shù)據(jù)采集板：模擬板、 MTB板。接口板： 功率板（閥、泵、步進(jìn)電機(jī)控制）、 傳感器接口,液路部分,動力元件：泵、注射器換向元件：二通閥、三通閥計量元件：注射器、定量泵、計量管管路：鋼管、膠管儲能器件：真空室、壓力室、隔離室、儲液室等其他：過濾

38、器、計數(shù)池、采樣針等,經(jīng)濟(jì)價值,提高醫(yī)院的技術(shù)水平，增強(qiáng)競爭力。吸引病源。高回報率。,,關(guān)注血球儀用戶,血液細(xì)胞分析儀是醫(yī)院進(jìn)行血常規(guī)檢查的必備儀器，在世界各地，在國內(nèi)各級醫(yī)院都得到了普及應(yīng)用。對疾病的診斷何鑒別診斷起到了重要的作用。目前國內(nèi)銷售的血液細(xì)胞分析儀品牌很多，有日本東亞、美國－庫爾特，等等，型號、規(guī)格也很多，給用戶選購代來諸多不便。,關(guān)注血球儀用戶,醫(yī)院在購買血液細(xì)胞分析儀時從以下幾個方面考慮：1. 

39、60;實(shí)用性：醫(yī)院應(yīng)根據(jù)自身的能力和日檢樣本量確定購買何檔次的儀器，一味訂高檔儀器，會帶來購置何實(shí)用的浪費(fèi)。2.  儀器性能：至關(guān)重要，不能全聽供應(yīng)商的廣告、宣傳，要多聽專家意見和走訪儀器使用醫(yī)院。3.   性價比,現(xiàn)代血球儀的主要進(jìn)展,隨著高科技的引用和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，各種先進(jìn)的血細(xì)胞分析測試技術(shù)被應(yīng)用到血細(xì)胞分析儀上。87年Coulter 公司發(fā)明的VCS(Volume-體積;Conduc

40、tivity-電導(dǎo)性;scatter-光散射）技術(shù)可使血液細(xì)胞未經(jīng)處理與體內(nèi)形態(tài)完全相同的狀態(tài)下進(jìn)行測試。 而東亞（SYSMEX)的NE-8000和SF-3000 采用了阻抗與射頻技術(shù)聯(lián)合的血細(xì)胞分類法。,現(xiàn)代血球儀的主要進(jìn)展,90年代后，儀器的自動化程度增高，測試速度達(dá)到120份/小時；可進(jìn)行多參數(shù)分析（高達(dá)30余項(xiàng)）；精度提高（采用重復(fù)計數(shù)、微孔清潔、取中段血樣、鞘流技術(shù)、流式細(xì)胞計數(shù)原理…等先進(jìn)技術(shù)）準(zhǔn)確性提高，向5分類及鑒別幼

41、稚細(xì)胞發(fā)展。,現(xiàn)代血球儀的主要進(jìn)展,加強(qiáng)全面質(zhì)量管理，保證儀器檢測的可靠性，具有智能化，可對同一病人診斷的前后進(jìn)行對比，提出綜合意見，確定診斷方向，更加注意保護(hù)操作人員的安全（自動進(jìn)樣，自動混勻，吸樣針內(nèi)、外自動清洗等）；向流水線發(fā)展，將血球儀、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)儀、推片機(jī)、染色機(jī)聯(lián)成流水操作線。,多功能合成化 流式細(xì)胞分析儀的某些功能合并到血細(xì)胞分析儀上，這樣在進(jìn)行常規(guī)血細(xì)胞分析時就可以得到某些淋巴細(xì)胞亞群的分析結(jié)果，如： Co

42、ulter STKS上可以同時測定CD4和CD8， Abbott CELL-DYN 4000上可以測定CD3、CD4、CD8和CD61，使得一機(jī)兩用。 增加幼稚細(xì)胞分析和有核紅細(xì)胞分析功能，甚至對血液細(xì)胞中的某些寄生蟲進(jìn)行提示，如： Sysmex SF-3000/SE-9000/SE-9500/XE-2100;  Bayer ADVIA 120;

43、60;Abbott CELL-DYN3500/4000;  Coulter HmX/LH750/GEN.S System 2,產(chǎn)品的系列化各公司不斷開發(fā)系列化產(chǎn)品以滿足不同類型用戶的需要。例如：Coulter公司 ACT 8型只有8個參數(shù)到12參數(shù) 18參數(shù)三分類ACT DIFF 5分類的ACT 5-DIFF 動物血液分析

44、Sysmex SE系列、K系列、F系列等 此外Abbott、ABX、日本光電、Swelab等公司都有各種系列化儀器不斷推出，以滿足各種需求。,流水線化 在全自動血液分析儀器的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)全自動流水線化，是血液分析的又一大飛躍，但這需要雄厚的資金支持。 流水線化即是將血液常規(guī)分析中的所有步驟和項(xiàng)目進(jìn)行系統(tǒng)性聯(lián)合，將血液常規(guī)分析、網(wǎng)織紅細(xì)胞分析、血片的制備(選擇、涂片、編號、染色、干燥)等系列步驟通過儀器自動完成。這種流

45、水線可以將具有不同功能的單個設(shè)備用自動傳送系統(tǒng)連接在一起 例如： Sysmex的HST型小型流水線血液分析儀將電腦控制終端、SE-9000血細(xì)胞分析儀、R-3000網(wǎng)織細(xì)胞分析儀、SP-100血片涂片機(jī)連結(jié)在一起，使血液標(biāo)本從計數(shù)開始自動按程序運(yùn)行到推片和染色結(jié)束，全部自動進(jìn)行。 Coulter LH700系列。近年來Abbott、ABX都有類似小型血細(xì)胞分析流水線系統(tǒng)推出,重點(diǎn)回顧,血液細(xì)胞分析儀的測試原理?