海藻渣中巖藻聚糖硫酸酯的提取、純化及其體外活性研究.pdf

1、巖藻聚糖硫酸酯是褐藻中一種十分重要的硫酸多糖,具有抗病毒、抗凝血、抗氧化以及調節(jié)免疫等廣泛的生物活性。海帶(Laminariajaponica)和巨藻(LessoniaNigrescen)常作工業(yè)原料,其工業(yè)藻渣中含有豐富的巖藻聚糖硫酸酯。本文以海帶和巨藻藻渣為原料,確立了海藻渣中巖藻聚糖硫酸酯的高效制備技術,對所得巖藻聚糖硫酸酯進行了分級純化,研究了其化學組成及其體外抗氧化和PTP1B抑制活性,其研究結果如下:
　　1、利用單因

2、素實驗、響應面分析法和均勻試驗設計,建立數(shù)學模型及回歸方程;比較了氯化鈣水提法、超聲波輔助酸提法和普通水提法的最佳提取條件下,巖藻聚糖硫酸酯的提取率及化學成分;確立了超聲波輔助提取法為海藻渣中巖藻聚糖硫酸酯最優(yōu)高效制備工藝為:溫度90℃,超聲70min,水浴2h,料液比1:80,pH=6。
　　2、在最佳制備工藝下,分別提取了海帶和巨藻藻渣中的巖藻聚糖硫酸酯,對其進行化學組分分析和分子量測定。海帶LF提取率為4.49％,巨藻NF提

3、取率為3.69%;LF富含硫酸根而NF巖藻糖含量較高。高效液相色譜分析表明,初步純化后的LPF和NPF的單糖組成發(fā)現(xiàn)LPF的巖藻糖和半乳糖摩爾比為1.03:1,半乳糖和巖藻糖含量均較高,此外,還含有葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和少量鼠李糖、木糖;NPF以巖藻糖為主,其次鼠李糖和甘露糖含量較高,此外,含有半乳糖和木糖和少量葡萄糖,未檢測到葡萄糖醛酸。LPF和NPF的高效凝膠色譜測定,分子量分別為142KDa和136KDa。
　　3、比

4、較了氯化鈣純化法和乙醇純化法,乙醇較氯化鈣法所得巖藻聚糖硫酸酯得率較低,但所得巖藻聚糖硫酸酯純度較高。純化后LPF和NPF與未純化粗品LF和NF相比,總糖和巖藻糖含量均有提高,但硫酸根含量降低。
　　4、經(jīng)過DEAE-SepharoseFF陰離子交換柱層析純化LPF和NPF后,分別得到三個組分,其化學組成和單糖構成均有差異,L1的葡萄糖摩爾比例較高,此外,還含有甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖和少量的鼠李糖和木糖;L2中半乳糖含量相對最

5、高,其他單糖也均有檢測出;L3單糖組成相對簡單,半乳糖和巖藻糖含量較高,未檢測出甘露糖和木糖。N1葡萄糖含量較小,以巖藻糖為主;N2中甘露糖和葡萄糖醛酸含量較高,未檢測出鼠李糖;L3和N3單糖組成相似。
　　5、巖藻聚糖硫酸酯體外抗氧化能力表明,LF和NF均有良好的清除超氧陰離子自由基、清除羥自由基和還原力。LF和NF清除50%超氧陰離子自由基所需濃度(EC50)分別為1.564mg/mL和1.506mg/mL。LF體外總體抗氧化