三種褐藻中巖藻聚糖硫酸酯的純化及結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、多肋藻、日本真海帶與厚葉解曼藻是具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的三種褐藻,巖藻聚糖硫酸酯(Fucoidan)也稱褐藻多糖硫酸酯、褐藻糖膠,主要存在于多種褐藻中,是一種水溶性的硫酸雜多糖,具有多種生物活性,是海洋生物活性物質(zhì)的研究熱點(diǎn)。本研究以此三種褐藻為原料,用DEAE-Sepharose Fast Flow弱陰離子交換層析分離純化巖藻聚糖硫酸酯,分別得到4、3、4種組分。對(duì)各組分的總糖、硫酸基、巖藻聚糖硫酸酯含量進(jìn)行了測定和對(duì)比;并對(duì)比分析了其分子

2、結(jié)構(gòu)。
　　通過對(duì)多肋藻、日本真海帶和厚葉解曼藻進(jìn)行復(fù)合酶解提取,乙醇分級(jí)沉淀法純化,制備得到巖藻聚糖硫酸酯產(chǎn)品CF、SF和KF;利用DEAE-Sepharose Fast Flow弱陰離子交換層析對(duì)巖藻聚糖硫酸酯進(jìn)行分離純化。多肋藻經(jīng)分離純化得到四個(gè)組分CF1、CF2、CF3和CF4,多糖組分主要集中在鹽洗脫部分,其得率分別為2.81%、27.55%、11.44%、23.48%,CF2為低硫組分,其硫酸基含量為1.01%,CF4

3、為高硫組分,硫酸基含量為16.12%;日本真海帶經(jīng)分離純化得到三個(gè)組分SF1、SF2以及SF3,多糖組分也主要集中在鹽洗脫部分,得率分別為12.95%、63.71%、15.70%,其中SF2為低硫組分,其硫酸基含量為5.56%, SF3為高硫組分,硫酸基含量達(dá)高達(dá)27.08%;厚葉解曼藻經(jīng)分離純化得到四個(gè)組分 KF1、KF2、KF3以及 KF4,多糖組分全部集中在鹽洗脫部分,各組分分別占組分總量的4.41%、18.98%、4.04%、5

4、7.45%,其中KF1為低硫組分,其硫酸基含量為4.27%,KF4為高硫組分,硫酸基含量達(dá)高達(dá)29.31%。
　　經(jīng)Sephadex G200凝膠柱分離可知,真海帶和厚葉解曼藻所得組分SF1、SF2、SF3、KF1、KF2、KF3和KF4組成單一,分子量分別約為48KD、146KD、155KD,136KD、136KD、119KD、104KD;多肋藻所得組分CF1、CF2和CF4的分子量約為52KD、5KD和94KD,其中CF3經(jīng)凝

5、膠柱層析分離后得到兩個(gè)峰,即CF3-1和CF3-2,表明CF3組分純化程度較差,兩個(gè)組分分子量約為103KD和5KD。
　　對(duì)11個(gè)組分進(jìn)行氣相色譜、紅外光譜以及核磁共振波譜分析。經(jīng)氣相色譜分析各個(gè)組分的單糖組成,結(jié)果表明:其中9個(gè)組分主要是由巖藻糖、半乳糖、甘露糖及少量的木糖、葡萄糖五種單糖組成,單糖組成與大多數(shù)褐藻相似,真海帶SF3及厚葉解曼藻KF4單糖組成單一,僅含巖藻糖(100%);三種褐藻中,硫酸基含量及巖藻糖含量最高的

6、均為CF4、SF3、KF4。經(jīng)紅外光譜分析,結(jié)果表明:3450-3300cm-1附近出現(xiàn)的O-H伸縮振動(dòng)峰,是糖類共有的;2935cm﹣1附近的是C-H伸縮振動(dòng)峰,是巖藻糖中甲基的吸收峰;1250cm﹣1附近有強(qiáng)吸收峰,是硫酸基(S=O)的吸收峰,證明11個(gè)組分均是含有硫酸基取代的多糖;通過C-O-S伸縮振動(dòng)的不同吸收位置(845cm﹣1、820cm-1),確定各個(gè)組分的硫酸基取代位置分別為:SF3、KF2、KF3和KF4的硫酸基在巖藻

7、糖和半乳糖的 C4位;CF1、CF2、CF3、SF2的硫酸基在巖藻糖的C2和C3位及半乳糖的C6位;CF4、SF1、KF1的硫酸基在巖藻糖的C2、C3、C4位,以及半乳糖的C4、C6;CF2、SF2在880cm-1附近有吸收峰,端基碳構(gòu)型可能是β-D-吡喃糖;CF4、SF1、SF3、KF1、KF2、KF3和 KF4在850cm-1附近有吸收峰,端基碳構(gòu)型可能是α-型吡喃糖。經(jīng)核磁共振波譜分析,結(jié)果表明:氫譜中高場區(qū)(1.2ppm左右)有