梅花參巖藻聚糖硫酸酯的提取制備工藝及質量控制研究.pdf

1、本論文從來源于我國南海、資源豐富、價格適中的海參品種梅花參的體壁中提取分離純化得到了一種巖藻聚糖硫酸酯，確定了其最佳制備工藝；采用金屬離子催化的氧化降解法和酸降解法制備得到一系列梅花參巖藻聚糖硫酸酯降解產物，并對其進行化學成分及含量分析和抗凝血活性的研究，為梅花參巖藻聚糖硫酸酯的質量標準的建立提供基礎，也為我國開發(fā)新型的海參抗凝血藥物提供科學依據(jù)。
　　采用堿解和酶解反應相結合的方法對梅花參體壁進行處理得到游離多糖，經除蛋白、沉淀

2、、鹽析分級、超濾等純化手段制備得到梅花參巖藻聚糖硫酸酯（FUC）。堿解-酶解聯(lián)用的方法優(yōu)于堿解、酶解和酶解-堿解等工藝路線。正交試驗篩選出了堿解工藝條件和酶處理工藝條件。等電點沉淀法可以有效去除蛋白質。最終確定提取純化巖藻聚糖硫酸酯的最佳工藝為：40±2℃條件下用8倍量（v/w）的0.5 M NaOH堿解3小時；按照藥材投量加入木瓜蛋白酶0.5％（w/w），50±2℃攪拌酶解6 h，反應液pH值為6.5，經堿解-酶解的處理后的提取液，調

3、節(jié)pH值至2.5，4℃靜置不超過4 h，離心（4000 rpm?30 min）去沉淀，調節(jié)溶液pH值至中性，上清液經過三步醇沉-鹽析，超濾，冷凍干燥，即得到梅花參巖藻聚糖硫酸酯（FUC）。
　　采用金屬離子催化的氧化降解法和酸降解法制備得到10個梅花參巖藻聚糖硫酸酯降解產物（dFUC1~10）。該降解方法簡單，條件溫和，反應可控，收率較高。
　　本論文制備得到的梅花參巖藻聚糖硫酸酯及其降解產物均具有一定的抗凝活性，其中，巖藻

4、聚糖硫酸酯延長APTT的能力強于其降解產物。巖藻聚糖硫酸酯降解產物dFUC-1對PT及Fib的幾無影響或與APTT變化趨勢一致，具有開發(fā)為良好抗凝藥物的潛力。
　　利用高效凝膠過濾色譜法（HPSEC）測定梅花參巖藻聚糖硫酸酯及其降解產物分子量，利用不同的解聚方法可獲得不同分子量的降解產物，且分子量分布較小。利用三氟乙酸（TFA）水解，明膠氯化鋇法測定梅花參巖藻聚糖硫酸酯及其降解產物硫酸酯基的含量，梅花參多糖富含硫酸酯基，且解聚未引