佛手中活性成分提取分離及其體外活性測試研究.pdf

1、佛手是蕓香科植物香櫞的干燥果實，主要含有揮發(fā)油、香豆素類、黃酮類、多糖等化學(xué)成分，具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抗炎、抗氧化等藥理作用，作為重慶的一種道地藥材具有較高研究價值。當(dāng)前，對佛手植物的開發(fā)利用大多停留在其揮發(fā)油成分方面，而對佛手中大量的其他活性成分及其相應(yīng)的生物活性研究卻較少。據(jù)此，本文在綜述佛手藥材相關(guān)研究進(jìn)展的基礎(chǔ)上，對佛手的活性化學(xué)成分及生物活性進(jìn)行研究，為深入開發(fā)利用佛手資源提供科學(xué)依據(jù)。
　　本文的主要研究工作及成果包

2、括：
　　1.采用溶劑提取法對佛手進(jìn)行了系統(tǒng)分離和鑒定。以60％乙醇溶液為溶劑對佛手進(jìn)行提取后，采用有機(jī)溶劑萃取，重點對石油醚、乙酸乙酯萃取層進(jìn)行系統(tǒng)分離，然后利用柱層析、重結(jié)晶、制備薄層色譜等方法進(jìn)行分離純化，依照理化性質(zhì)和與標(biāo)準(zhǔn)核磁圖譜的對照，鑒定出了五種單體化合物，即：檸檬油素、濱蒿內(nèi)酯、傘形花內(nèi)酯、佛手柑內(nèi)酯和胡蘿卜苷，為后續(xù)的抗腫瘤活性成分的篩選及測試提供供試品。
　　2.采用單因素實驗與正交優(yōu)化法對佛手多糖的水提

3、工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定提取佛手多糖的最佳參數(shù)為：提取溫度90℃、料液比1:15、提取時間2h、提取次數(shù)3次。通過苯酚-硫酸法對佛手粗多糖中的總多糖的含量進(jìn)行測定，測得佛手中總多糖在粗多糖中含量為61.51%。采用逐級醇沉法對佛手多糖類成分進(jìn)行初步分離，逐級醇沉得三種粗多糖（FSP-1、FSP-2和FSP-3），得率分別為5.75%、3.57%、4.34%，作為此后的抗氧化活性測試物。此外，采用DEAE纖維素柱層析法對佛手粗多糖FSP-1進(jìn)行

4、了分離純化，得到2種純多糖（BP-1、BP-2），BP-1和BP-2水解后，經(jīng)TLC分析，發(fā)現(xiàn)其單糖成分均為葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖。
　　3.采用體外細(xì)胞毒性測試實驗，對分離得到的四種香豆素類成分（檸檬油素、濱蒿內(nèi)酯、傘形花內(nèi)酯、佛手柑內(nèi)酯）和佛手粗多糖的體外抗腫瘤作用效果進(jìn)行了測試。通過96孔板培養(yǎng)-熒光檢測分析，測試了上述四種香豆素類成分和佛手多糖的體外抗腫瘤作用，結(jié)合倒置顯微鏡觀測了上述分離產(chǎn)物對細(xì)胞形態(tài)的影響。研究顯示，

5、檸檬油素、濱蒿內(nèi)酯和佛手柑內(nèi)酯對143B人骨肉瘤細(xì)胞的生長有明顯的抑制作用，顯微鏡觀測檸檬油素、濱蒿內(nèi)酯和佛手柑內(nèi)酯三種活性成分對腫瘤細(xì)胞生長情況的影響，也顯示出其對腫瘤細(xì)胞增殖具有抑制作用。
　　4.基于化學(xué)發(fā)光分析法建立了適用于佛手多糖體外自由基清除能力測試的抗氧化活性評價方法。該方法根據(jù)系統(tǒng)化學(xué)發(fā)光被抑制的程度，評價佛手多糖對活性氧自由基的體外的清除能力。實驗通過優(yōu)化化學(xué)發(fā)光體系實驗參數(shù)，測試得到三種粗多糖（FSP-1、FS