酯交換大豆油技術(shù)及植物甾醇快速檢測(cè)方法建立.pdf

1、植物甾醇存在于植物細(xì)胞中，具有十分重要的生理價(jià)值，被廣泛應(yīng)用在醫(yī)學(xué)、食品、化工、植物基因工程等領(lǐng)域。自從發(fā)現(xiàn)植物甾醇至今，其定量分析一直處于完善改進(jìn)之中，各種分析手段有利有弊，目前尚無(wú)測(cè)定植物油中植物甾醇含量的國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法。
　　 本研究借鑒現(xiàn)有的檢測(cè)食品和食用油中甾醇含量的紫外比色分析方法，以酯交換技術(shù)獲得的富含甾醇的大豆油為研究體系，分別采用紫外比色法、氣相色譜法對(duì)甾醇進(jìn)行了定量及定性分析，旨在建立一種快捷、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確且低成

2、本的甾醇測(cè)定方法，為添加植物甾醇的功能性植物油中甾醇的測(cè)定提供快速和簡(jiǎn)單的分析方法。初步建立測(cè)定酯交換大豆油中植物甾醇含量的紫外比色法，并探討了測(cè)定條件對(duì)顯色反應(yīng)的影響，確定了最佳測(cè)定參數(shù)和條件。通過(guò)測(cè)定結(jié)果的對(duì)比分析，紫外比色法測(cè)定植物甾醇總含量接近氣相色譜法測(cè)定值，可方便、快捷、準(zhǔn)確地測(cè)定酯交換大豆油中植物甾醇的含量，為植物甾醇酯交換反應(yīng)過(guò)程研究提供分析的理論依據(jù)和技術(shù)參數(shù)，填補(bǔ)了我國(guó)添加植物甾醇的功能性植物油的日常生產(chǎn)監(jiān)控方法的空

3、白。
　　 本研究的主要內(nèi)容：
　　 (1)氣相色譜法的建立
　　 應(yīng)用氣相色譜法對(duì)酯交換大豆油中甾醇進(jìn)行了分析測(cè)定，試驗(yàn)采用HP-5毛細(xì)管柱(30m×0.32mm×0.25μ m)為色譜分析柱，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用該法可對(duì)酯交換大豆油中甾醇進(jìn)行定量及定性分析，克服了氣相色譜法測(cè)定植物甾醇樣品時(shí)需要衍生化預(yù)處理的缺點(diǎn)，該法測(cè)定植物甾醇的響應(yīng)時(shí)間小于16min，且各種甾醇的分離效果較好。
　　 (2)紫外比色

4、法的建立及評(píng)價(jià)
　　 紫外比色法測(cè)定條件的確定：利用甾醇與鐵礬試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，產(chǎn)生紫外吸收的原理，測(cè)定酯交換大豆油中甾醇的紫外光譜，經(jīng)前處理后的植物甾醇通過(guò)紫外光譜掃描確定最大吸收波長(zhǎng)為564nm，測(cè)定植物甾醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線。探討了顯色劑用量、顯色劑組成比例、顯色時(shí)間和顯色溫度對(duì)紫外吸收光譜的影響，確定了最優(yōu)測(cè)定參數(shù)為：顯色劑用量2mL，顯色劑組成比例2:8，顯色時(shí)間30 min，顯色溫度20℃，確定紫外比色法的測(cè)定條件。酯交換大

5、豆油的前處理：通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)，對(duì)皂化法提取植物甾醇的條件進(jìn)行了優(yōu)化。得到了最優(yōu)提取參數(shù)為：皂化時(shí)間30 min，皂化溫度80℃，堿濃度1.5 mol/L，料液比0.05g/mL。
　　 紫外比色法測(cè)定結(jié)果略高于氣相色譜法，紫外比色法測(cè)定絕對(duì)值平均高0.14％，絕對(duì)誤差最大為0.21%，平均偏高0.14%，相對(duì)誤差最大為3.7%，平均偏高2.95%。差別幅度與甾醇含量不存在關(guān)聯(lián)，紫外比色法測(cè)定植物甾醇總含量接近氣相色譜法測(cè)定

6、值。紫外比色法的測(cè)定結(jié)果的精密度較高，平均回收率為98.61%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.57%，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
　　 (3)高含量甾醇的酯交換大豆油的制備
　　 采用紫外比色法監(jiān)測(cè)酯交換大豆油中甾醇的含量，通過(guò)響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)確定了最優(yōu)加工工藝，甾醇添加量5%，反應(yīng)溫度70℃，酶用量1.02%，反應(yīng)時(shí)間3h，在此條件下，酯化率的預(yù)測(cè)值為88.16%，而實(shí)際測(cè)得的酯化率為87.81%，實(shí)際值與預(yù)測(cè)值之間的相對(duì)誤差為0.35%，