臍血臍帶干細(xì)胞制備工藝、深低溫保存及質(zhì)量控制優(yōu)化研究.pdf

1、深低溫保存技術(shù)使得活體組織、細(xì)胞乃至生命體在深低溫下長期存活成為可能。在過去的幾十年里，深低溫技術(shù)依據(jù)冰凍損傷的原理，在冷凍方法、凍存保護(hù)劑、保存容器以及復(fù)蘇與洗脫程序等方面的研究取得了不少成果，并在醫(yī)療、細(xì)胞資源保存等領(lǐng)域都得到了廣泛的應(yīng)用。本研究從深低溫保存技術(shù)研究應(yīng)用進(jìn)展著手，探討深低溫技術(shù)在臍血臍帶干細(xì)胞保存以及干細(xì)胞相關(guān)組織的深低溫保存的工藝和質(zhì)量管理優(yōu)化。
　　深低溫技術(shù)在臍血資源保存方面，已實(shí)現(xiàn)了臍血資源的變廢為寶，

2、收集保存的臍血已成為臨床造血干細(xì)胞移植的重要來源。臍血應(yīng)用進(jìn)一步推動了臍血庫的發(fā)展，到2014年9月全球已有自體臍血庫167家，儲存臍血130萬份，公共庫54家，儲存臍血45萬份，臍血移植在造血干細(xì)胞移植中的比例已超過三成。正式開展臍血保存以來，每次制備技術(shù)工藝的改進(jìn)或新設(shè)備的應(yīng)用都會使臍血制備簡化，效率和質(zhì)量大幅提升。通過分析研究山東省臍血庫現(xiàn)行工作中自主發(fā)明的卡式分漿夾的應(yīng)用情況，評價(jià)了新工藝的應(yīng)用對臍血制備的影響。此外，還從深低溫

3、保存時(shí)間對臍血干細(xì)胞成份的影響方面進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以驗(yàn)證臍血長期深低溫保存的技術(shù)基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，臍血干細(xì)胞保存1個(gè)月與保存6個(gè)月在單個(gè)核細(xì)胞(MNC)、造血干細(xì)胞(CD34+細(xì)胞)回收率以及免疫細(xì)胞比例方面均無顯著差異，雖然凍存后會造成有核細(xì)胞的輕微損失（10％左右），但凍存1個(gè)月與6個(gè)月后復(fù)蘇的臍血細(xì)胞存活率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)具有來源廣泛、取材方便、相對純凈、含量豐富及免疫原性低等優(yōu)點(diǎn)，也已成

4、為干細(xì)胞深低溫保存的重要目標(biāo)?，F(xiàn)行臍帶保存一般是從臍帶中分離制備得到MSC后再長期儲存，但存在制備周期長，成本高和生產(chǎn)效率差等問題，而且現(xiàn)行工藝MSC制備后富含干細(xì)胞的臍帶華通膠組織都將被作為廢棄物丟棄。若建立一種直接凍存臍帶華通膠組織的方案，則只需要約2～3個(gè)小時(shí)即可完成一份臍帶的保存，且可以同時(shí)保存多種干細(xì)胞;當(dāng)需要應(yīng)用干細(xì)胞時(shí)，可將組織復(fù)蘇進(jìn)行MSC分離制備。為此，進(jìn)行了臍帶華通膠組織深低溫保存方法的實(shí)驗(yàn)研究，并獲得了初步優(yōu)化的深

5、低溫保存的保護(hù)劑體系和冰凍降溫方法。
　　干細(xì)胞資源的深低溫保存將是一項(xiàng)長青工程，不斷優(yōu)化干細(xì)胞保存的工藝質(zhì)量控制勢在必行。以往干細(xì)胞保存是按照傳統(tǒng)生物實(shí)驗(yàn)室模式管理，沒有系統(tǒng)的質(zhì)量管理，質(zhì)量追溯系統(tǒng)不完善。按照GMP和ISO9001管理原則，對干細(xì)胞采集、運(yùn)輸、制備和儲存各環(huán)節(jié)提出了質(zhì)量優(yōu)化方案，建立了系統(tǒng)的質(zhì)量控制和技術(shù)記錄體系，保證了生產(chǎn)制備工藝的可追溯性和產(chǎn)品質(zhì)量的可靠性。
　　通對深低溫技術(shù)目前的研究應(yīng)用現(xiàn)狀的了解