葡萄籽原花青素制備工藝及真菌毒素檢測(cè).pdf

1、本文以葡萄籽為原料,研究原花青素的制備工藝及葡萄籽和提取物中真菌毒素的分析測(cè)定方法。采用罐組式逆流提取法對(duì)葡萄籽進(jìn)行提取。分別以水和乙醇為提取溶劑,經(jīng)正交實(shí)驗(yàn)得到最佳工藝條件。以水為溶劑時(shí)采用整粒葡萄籽,料液比(g:mL)1:3,提取溫度100℃,提取級(jí)數(shù)四級(jí),提取時(shí)間40min/級(jí);與單罐水提取法相比,動(dòng)態(tài)罐組式逆流法的提取率略有提高,提取時(shí)間減少33％,單位藥材的溶劑消耗量減少75%。以乙醇為溶劑時(shí)采用葡萄籽粗粉(20目),55%(

2、v/v)乙醇,料液比(g:mL)1:6,提取溫度75℃,提取級(jí)數(shù)3級(jí),提取時(shí)間30min/級(jí)。與單罐乙醇回流提取法相比,本法提取率基本相同,提取溫度降低11.8%,提取時(shí)間縮短25%,單位藥材的溶劑消耗量減少44%。以上研究表明,與常規(guī)提取法相比,罐組式逆流提取法能獲取較高的提取率,同時(shí)大大減少提取溶劑用量,縮短提取時(shí)間,是一種高效節(jié)能的提取方法。選用AB-8大孔樹脂對(duì)葡萄籽提取液進(jìn)行純化。工藝路線如下:上樣液濃度為8.28 mg mL

3、-1,流速為2BVh-1,上樣6 BV。以4 BV h-1的流速水洗4BV去除大部分非原花青素成分,根據(jù)生產(chǎn)需要可采用兩種洗脫方式:(1)20%乙醇以2BV/h的流速洗脫4 BV,再用40%乙醇以2 BV h-1的流速洗脫4BV,收集洗脫液,減壓濃縮,冷凍干燥。(2)直接用40%乙醇以2 BV h-1的流速洗脫4 BV,收集洗脫液,減壓濃縮,冷凍干燥。樹脂柱清洗,重復(fù)使用。應(yīng)用近紅外透射光譜分析技術(shù),建立葡萄籽提取物大孔樹脂純化過程的定

4、量測(cè)定模型,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)葡萄籽多酚洗脫過程濃度的動(dòng)態(tài)變化。模型采用偏最小二乘法(PLS),9個(gè)主因子,相關(guān)系數(shù)R2達(dá)到0.9995,RMSEC為0.713,RSEC為2.39%。與傳統(tǒng)方法(比色法)相比,采用本方法可以在20 s進(jìn)行一次測(cè)定,而比色法需要2 h以上。該方法能快速、無損、有效地測(cè)定大孔樹脂洗脫液中多酚的濃度,對(duì)生產(chǎn)過程進(jìn)行質(zhì)量控制。采用13C17-AFB1同位素內(nèi)標(biāo),首次建立了同時(shí)測(cè)定葡萄籽(包括皮和梗)中AFB1、AFB2、

5、MPA和STC的UHPLC-MS法。方法學(xué)研究表明,該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,能在4 min內(nèi)將4種真菌毒素完全分離并準(zhǔn)確測(cè)定,可用于葡萄籽中AFB1、AFB2、MPA和STC等4種真菌毒素的分析測(cè)定。采用13C20-OTA同位素內(nèi)標(biāo),建立了測(cè)定葡萄籽及其提取物原花青素中OTA的UHPLC-MS法,該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,可用于葡萄籽及其提取物原花青素中OTA的分析測(cè)定。在此基礎(chǔ)上,研究了OTA在葡萄籽提取及大孔樹脂純化過程的轉(zhuǎn)移與殘留,結(jié)果表明,采