改性聚N-異丙基丙烯酰胺協(xié)助蛋白質(zhì)體外復(fù)性研究.pdf

1、蛋白質(zhì)體外重折疊復(fù)性技術(shù)已成為目前基因工程蛋白質(zhì)產(chǎn)業(yè)化的瓶頸問題。開發(fā)新型、高效，同時(shí)又易于操作和回收的蛋白質(zhì)體外復(fù)性添加劑成為近年來的研究熱點(diǎn)之一，其中聚N-異丙基丙烯酰胺（PNIPAM）作為一種溫敏型聚合物受到了研究者的極大關(guān)注。本文以溫敏型PNIPAM類聚合物作為研究對(duì)象，采用共聚、表面接枝以及特定功能基團(tuán)引入等方法對(duì)聚合物進(jìn)行了改性，并對(duì)改性后PNIPAM聚合物協(xié)助蛋白質(zhì)體外復(fù)性過程進(jìn)行了研究。
　　 采用反相懸浮法合成

2、一系列具有不同丙烯酸鈉含量的粒狀共聚凝膠P(NIPAM-co-SA)，對(duì)凝膠粒子的形態(tài)以及溫敏性能進(jìn)行了研究。將共聚凝膠用于親水性較強(qiáng)的溶菌酶體外復(fù)性，考察了各種復(fù)性條件對(duì)于溶菌酶復(fù)性過程的影響。當(dāng)?shù)鞍诐舛葹?50μg/ml時(shí)，P(NIPAM-co-SA)(A=4％)的加入可以使復(fù)性收率從稀釋復(fù)性的55.6%增加到76.5%。共聚凝膠重復(fù)利用5次后溶菌酶的活力回收率仍有61.5%。通過對(duì)復(fù)性蛋白的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，確定共聚凝膠通過有效抑制復(fù)

3、性過程中聚集體的生成提高復(fù)性收率。
　　 采用無皂乳液聚合法和光引發(fā)法合成了接枝有PNIPAM毛發(fā)的聚苯乙烯微球(PS-grafted-PNIPAM)，研究了微球的形態(tài)和溫敏性能?？疾炝司哂胁煌诵拇笮『兔l(fā)長度的PS-grafted-PNIPAM微球協(xié)助模型蛋白溶菌酶和重組人γ-干擾素(rhIFN-γ)包涵體體外復(fù)性的效果，優(yōu)化了加膠量、溫度、尿素濃度等復(fù)性條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PS-grafted-PNIPAM微球可以大幅提高

4、溶菌酶和rhIFN-γ的復(fù)性收率。
　　 采用RAFT方法合成了三種具有不同巰基負(fù)載量的PS-grafted-PNIPAM微球。以溶菌酶為模型蛋白考察了巰基改性PS-grafted-PNIPAM微球在不同氧化型谷胱甘肽(GSSG)濃度下協(xié)助復(fù)性的效果，為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　 改性PNIPAM微球通過與變性蛋白的疏水相互作用協(xié)助目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行體外重折疊復(fù)性，具有良好的協(xié)助蛋白質(zhì)體外復(fù)性效果，同時(shí)PNIPAM的溫敏性