鏈霉素生產(chǎn)菌株的選育及發(fā)酵條件的研究.pdf

1、乙酰異戊酰泰樂菌素(Acetylisovaleryltylosin,縮寫為AIV)是一種十分重要的泰樂菌素(Tylosin)衍生物,它是由耐熱鏈霉菌ATCC11416通過生物轉化Tylosin,在Tylosin的3'-羥基位置乙?；?"-羥基位置異戊?；玫降?進行催化的兩個酶分別為乙?；D移酶和異戊酰基轉移酶。本實驗從耐熱鏈霉菌ATCC11416出發(fā),通過誘變選育Carbomycin高產(chǎn)菌株,從而為高效的將Tylosin轉化為

2、AIV做好準備。
　　 為初步確定耐熱鏈霉菌的發(fā)酵條件,通過生長曲線的測定,發(fā)現(xiàn)耐熱鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)Carbomycin的發(fā)酵時間達到5天時其效價和菌體干重達到最大,第6天時效價和菌體量急劇下降,推測抗生素降解是由菌體自溶釋放物和pH值的降低的雙重因素造成的。本實驗采用紫外誘變和微波誘變相結合的方法對耐熱鏈霉菌Carbomycin高產(chǎn)菌株進行選育。經(jīng)兩次紫外誘變后,其耐熱鏈霉菌的發(fā)酵效價由最初的12.34μg／ml提高到97.96

3、μg／ml,增加了近7倍,對Tylosin耐受性也由6μg／ml增加到50μg／ml；再經(jīng)一次微波誘變后,耐熱鏈霉菌對Tylosin的耐受性也從50μg／ml提高到誘變后的80μg／ml,但其效價卻有一定的下降。通過發(fā)酵條件的優(yōu)化,確定發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳碳源和氮源分別為淀粉和蛋白胨,通過響應面分析確定其最優(yōu)濃度分別為63.5g／L和35.5g／L,比原最適濃度的發(fā)酵效價提高了5％。CaCO3的加入對Carbomycin的產(chǎn)量并無明顯影響,

4、但在添加異戊酰前體物Leu后,其發(fā)酵效價可達174.03μg／ml,比未添加Leu的發(fā)酵效價提高了19％。經(jīng)發(fā)酵條件優(yōu)化后,Carbomycin的發(fā)酵效價比未優(yōu)化前提高了近1倍。
　　 向發(fā)酵液中添加Tylosin并進行萃取后,利用HPLC-MS測定了發(fā)酵液中Tylosin轉化為AIV的轉化率,同時研究了不同添加量對轉化率的影響。當添加濃度低于150μg／ml時,轉化率穩(wěn)中有升,由74％升到75％。當添加濃度為200μg／ml時