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1、甾體激素類(lèi)藥物在制藥行業(yè)至關(guān)重要,在醫(yī)療領(lǐng)域的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大,并已廣泛應(yīng)用于臨床。甾體類(lèi)化合物是一類(lèi)含有環(huán)戊烷多氫菲核的化合物,在機(jī)體的生命活動(dòng)和醫(yī)藥領(lǐng)域都占有重要地位,植物甾醇屬于甾體類(lèi)化合物,其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物雄烯二酮(AD)是生產(chǎn)甾體激素類(lèi)藥物不可或缺的關(guān)鍵中間體。微生物轉(zhuǎn)化可以替代一些化學(xué)合成難以進(jìn)行的反應(yīng),逐漸成為甾體激素類(lèi)藥物生產(chǎn)的關(guān)鍵技術(shù),通過(guò)微生物轉(zhuǎn)化甾體類(lèi)化合物得到藥物關(guān)鍵中間體AD,再由其生產(chǎn)出有價(jià)值的甾體激素類(lèi)化合物,已
2、成為現(xiàn)在研究的熱點(diǎn)。
本文通過(guò)海洋微生物的菌株篩選,獲得對(duì)植物甾醇進(jìn)行定向生物轉(zhuǎn)化制備AD的菌株,并對(duì)其植物甾醇生物轉(zhuǎn)化制備AD的轉(zhuǎn)化工藝進(jìn)行優(yōu)化,從而提高AD的轉(zhuǎn)化率。同時(shí),對(duì)另一具有良好抗腫瘤活性的產(chǎn)物20-(羥甲基)孕-4-烯-3-酮進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化初步研究。本文主要研究結(jié)果如下:
?。?)利用來(lái)自中國(guó)東海海水的樣品,通過(guò)富集培養(yǎng)和植物甾醇寡培養(yǎng)基培養(yǎng)分離純化得到47株海洋微生物。結(jié)合實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)保藏的15株海洋微生
3、物,共62株海洋來(lái)源菌株,對(duì)植物甾醇進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化。最終篩選得到一株具有植物甾醇定向生物轉(zhuǎn)化制備AD能力的海洋菌株,通過(guò)形態(tài)學(xué)、16S rDNA核酸序列和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析,確定為分枝桿菌Mycobacterium sp.zqc-12。
?。?)對(duì)分枝桿菌zqc-12生物轉(zhuǎn)化植物甾醇制備AD工藝進(jìn)行優(yōu)化,以AD轉(zhuǎn)化率為指標(biāo),通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn),從培養(yǎng)基的組成和培養(yǎng)轉(zhuǎn)化條件兩方面來(lái)確定最佳工藝,最佳培養(yǎng)基組成:葡萄糖25g/L,
4、蛋白胨12g/L,磷酸氫二鈉0.7g/L,硫酸鎂0.5g/L,最佳培養(yǎng)轉(zhuǎn)化條件:初始pH7.5;培養(yǎng)溫度30℃,振蕩轉(zhuǎn)速180r/min,底物轉(zhuǎn)化時(shí)間72h,底物濃度1g/L,底物的處理方式為加助溶劑丙二醇。此條件下AD的轉(zhuǎn)化率為63.41%,比優(yōu)化前AD的轉(zhuǎn)化率提高了33.40%。
(3)對(duì)分枝桿菌zqc-12生物轉(zhuǎn)化植物甾醇生成20-(羥甲基)孕-4-烯-3-酮進(jìn)行研究,通過(guò)紫外線誘變和亞硝酸誘變的復(fù)合誘變,篩選獲得一株正
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