基于納米粒子和(或)酶信號(hào)放大的免疫傳感器用于蛋白質(zhì)檢測(cè)的研究.pdf

1、超靈敏的蛋白質(zhì)檢測(cè)方法的研究對(duì)疾病的診斷與治療、蛋白質(zhì)組學(xué)及生命科學(xué)的基礎(chǔ)研究具有非常重要的意義。近年來，免疫層析試紙條和電化學(xué)免疫傳感器由于其操作簡(jiǎn)單、便捷、不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備、可以在線檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，已成功應(yīng)用于蛋白質(zhì)檢測(cè)及疾病的早期診斷，并呈現(xiàn)出良好的實(shí)際應(yīng)用前景。但相對(duì)較低的靈敏度一定程度上阻礙了這兩種檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展。納米科技的高速發(fā)展和納米材料的廣泛應(yīng)用為上述關(guān)鍵問題的解決提供了新的思路與契機(jī)。本文使用SiO2納米粒子、TiO2

2、納米粒子制備了免疫層析試紙條和電化學(xué)免疫傳感器用于蛋白質(zhì)的超靈敏檢測(cè)，建立了作為模板蛋白的兔免疫球蛋白G(兔IgG)、鐵蛋白的定量檢測(cè)方法并用于實(shí)際樣品的測(cè)定。由于納米粒子和（或）酶的信號(hào)放大作用，制得的免疫傳感器靈敏度有顯著提高。
　　 本論文主要包括以下幾個(gè)方面的內(nèi)容：
　　 1．基于酶-納米二氧化硅標(biāo)記的試紙條免疫傳感器用于蛋白質(zhì)檢測(cè)的研究用反相微乳液法制備了單分散性好的二氧化硅納米粒子（以下簡(jiǎn)稱硅納米粒子），并在

3、該粒子表面共價(jià)鍵合堿性磷酸酯酶和抗體作為標(biāo)記物，利用三明治夾心免疫反應(yīng)，結(jié)合便攜式讀條機(jī)實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)的實(shí)時(shí)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。與酶標(biāo)免疫試紙條和膠體金免疫試紙條相比，制得的生物傳感器靈敏度有了明顯提高。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，響應(yīng)信號(hào)與兔IgG的濃度對(duì)數(shù)成良好的線性關(guān)系，線性范圍從0.05ngmL-1到2.5ngmL-1和2.5ngmL-1到50ngmL-1，檢測(cè)限0.02ngmL-1(S/N=3)。檢測(cè)時(shí)間16分鐘。
　　 2．酶聯(lián)熒光試紙

4、條免疫傳感器的制備及其在蛋白質(zhì)定量檢測(cè)中的應(yīng)用制備了一種新型的酶聯(lián)熒光試紙條免疫傳感器。這種傳感器通過堿性磷酸酯酶催化熒光底物產(chǎn)生熒光信號(hào)來定量檢測(cè)兔IgG。研究了緩沖溶液、底物用量、酶促反應(yīng)時(shí)間、酶標(biāo)抗體量等因素對(duì)試紙條檢測(cè)性能的影響，優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)條件。線性范圍從lngmL-1到350ngmL-1，檢測(cè)限lngmL-1(S/N=3)。其它干擾物質(zhì)的存在，如人血清白蛋白(HAS)，不會(huì)引起傳感器背景響應(yīng)信號(hào)變化，說明選擇性良好。通過選用復(fù)

5、雜生物基質(zhì)人體血清中兔IgG的測(cè)定，說明該傳感器可以用于實(shí)際樣品中蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。
　　 3．基于納米TiO2/殼聚糖復(fù)合膜的電化學(xué)免疫傳感器在鐵蛋白檢測(cè)中的應(yīng)用采用納米TiO2/殼聚糖復(fù)合膜技術(shù)將鐵蛋白抗體固定于玻碳電極表面，研制成用于檢測(cè)鐵蛋白的非標(biāo)記型免疫傳感器，用差示脈沖伏安法和交流阻抗法對(duì)電極的修飾過程進(jìn)行了表征。同時(shí)，以Fe(CN)637Fe(CN)64-作為氧化還原電化學(xué)探針對(duì)鐵蛋白進(jìn)行了定量檢測(cè)，隨著抗原與抗體